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人ZP3的第334-341位氨基酸肽段和341-360肽段被证明都存在天然的B细胞表位,而不引起T细胞免疫应答；利用疟原虫(Plasmodium falciparum)的辅助T细胞表位与人ZP3的第334-364肽段串联组成人ZP3的B细胞表位嵌合肽(hZP3 chimeric peptide,hCP),可望成为透明带避孕疫苗理想的候选抗原。人ZP3嵌合肽基因已合成并成功构建重组杆状病毒AcNPV-OCC~--hCP。本研究利用重组杆状病毒感染Hi5昆虫细胞,鉴定hCP基因在细胞中的表达,并对其表达条件进行初步探索；利用免疫制备的兔抗rhZP3抗体研究hCP的免疫活性和结合精子能力。 选择生长状态良好的Hi5昆虫细胞,用重组杆状病毒AcNPV-OCC~--hCP感染,观察感染症状；利用RT-PCR技术检测hCP基因的转录；利用Tricine-SDS-PAGE分析感染后的培养液有无特异蛋白条带,分子量大小；以不同剂量的病毒感染液感染Hi5细胞,感染的持续时间则不同,选择表达量高的感染时间作为最佳表达时间；以甲醇诱导rhZP3重组酵母工程菌 Pichia pastoris X-33的表达产物免疫兔制备抗血清,并应用空白酵母的表达产物做成吸附剂,以中和去除非特异性抗rhZP3的杂抗体；应用免疫组织化学技术,用正常人的含有生长卵泡的卵巢切片与rhZP3抗血清进行反应,以检测抗血清的特异性；利用Western blot技术检测hCP基因在昆虫细胞中的表达及其抗原性；应用间接竞争ELISA方法检测不同浓度的hCP对rhZP3抗原抗体反应的抑制率；以正常人精子与重组病毒感染的细胞培养液共孵育,利用精子的免疫细胞化学技术,检测hCP结合精子的能力。 研究结果表明,重组病毒感染Hi5细胞后,感染症状明显,细胞中有hCPmRNA的转录；蛋白质电泳发现重组病毒感染的昆虫细胞培养液在5.8KD附近有一条特异条带,Western blot技术也在同一位置鉴定出有一条特异条带,但是显色很淡；重组病毒感染Hi5细胞发现感染6天的培养液hCP的表达量最高；用含rhZP3的酵母表达产物免疫兔制备抗血清,经过吸附剂吸附中和以后,抗rhZP3特异性较高,但抗体滴度不高；正常人卵巢利用抗rhZP3血清进行的免疫组化观察ZP呈现棕色；间接竞争性ELISA检测到当重组病毒感染昆虫细胞表达蛋白浓度超过50μg/mL才对rhZP3抗原抗体反应有抑制作用,抑制率回归分析其斜率K值为0.0918；与重组病毒感染液共孵育后的精子免疫细胞化学也观察到在赤道环被染成棕色。 研究结果证明,重组杆状病毒感染His昆虫细胞后,hCP基因成功表达,感染时间应控制在5一6天；酵母表达的rhZP3免疫制备的抗血清能够与天然人ZP发生反应,但抗体滴度不高；hCP与抗rhZ陀血清有一定的反应性,但是活性并不高；精子的赤道环是否是hCP结合位点还有待进一步证实。