论文部分内容阅读
本实验以桑根皮素为研究对象,通过对20种癌细胞进行药物筛选实验,发现桑根皮素对大多数癌细胞有生长抑制作用,因此作者深入研究了桑根皮素对乳腺癌细胞MDA-MB-453、人肺癌细胞H1299和结肠癌细胞HCT116的增殖抑制作用,抗侵袭、浸润作用和诱导细胞凋亡的作用,并初步探讨其作用机制,为蚕桑业废物资源循环利用、蚕桑业可持续发展以及中药抗肿瘤作用奠定了基础,为桑枝皮中生物活性物质——一桑根皮素的药用研发以及临床应用提供了有用的理论和实验依据。本文的研究主要涉及以下内容:(1)本文以桑根皮素为药物,对20种癌细胞进行了药物筛选实验。实验分组为对照组(0.5%DMSO)和不同浓度桑根皮素处理组(1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml)。实验结果显示,桑根皮素对20种癌细胞均有抑制作用,其中高浓度处理组(20μg/ml)的肿瘤抑制率均可达到84%以上,均呈现浓度依赖。IC50结果显示,20种癌细胞的IC50平均值为6.211μg/ml,其中有80%的细胞IC50值小于等于6.45μg/ml。由此可以得出桑根皮素对大多数癌细胞有很好的抑制作用。(2)本文针对乳腺癌细胞MDA-MB-453、人肺癌细胞H1299和结肠癌细胞HCT116进行实验,用不同浓度桑根皮素溶液(1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml)处理以上三种细胞,处理时间分别为24h,48h,72h。实验结果说明,桑根皮素对以上三种细胞均有生长抑制作用,并呈现时间—浓度依赖性,其中20μg/ml桑根皮素溶液处理以上细胞48h后,肿瘤抑制率分别高达94.02%、97.9%和 91.9%。(3)不同浓度桑根皮素溶液(2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)处理乳腺癌细胞MDA-MB-453和结肠癌细胞HCT116,Western blotting结果显示,桑根皮素可上调上皮标志物E-钙粘蛋白(E-cadherin),下调间质细胞标记物N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin),并且均呈现剂量效应。说明桑根皮素可逆转EMT,抑制这三种肿瘤的迁移、侵袭和浸润。(4)不同浓度桑根皮素溶液(5μg/ml、1Oμg/ml、20μg/ml)作用于乳腺癌细胞MDA-MB-453、人肺癌细胞H1299和结肠癌细胞HCT116,48h后,实验结果显示细胞均发生凋亡,并呈现剂量依赖,其中MDA-MB-453细胞在高浓度(20μg/ml)桑根皮素溶液处理后,凋亡率高达77.73%,差异极显著(P<0.01)。Western blotting结果显示,桑根皮素可上调Bax和cleaved caspase-3,下调Bcl-2和caspase-3,说明桑根皮素可诱导乳腺癌、人肺癌和结肠癌细胞发生凋亡。(5)不同浓度桑根皮素溶液(2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)作用于乳腺癌细胞MDA-MB-453和结肠癌细胞HCT116,实验结果发现,桑根皮素浓度为10μμg/ml时,MDA-MB-453细胞被阻滞于G2期,HCT116细胞被阻滞于S期。因此说明桑根皮素可扰乱乳腺癌和结肠癌细胞的周期。