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烟草特有亚硝胺（Tobacco-Specific Nitrosamines，TSNAs）是仅存于烟草及烟气中的一类有害物质，是烟草调制过程中由烟草生物碱通过亚硝化作用形成的氮亚硝胺类化合物，主要包括4-(甲基亚硝胺基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮（NNK）、N-亚硝基降烟碱（NNN）、N-亚硝基假木贼碱（NAB）和N-亚硝基新烟草碱（NAT）。其中致癌性最强的是NNK和NNN，被国际癌症组织（IARC）列为Ⅰ类人体致癌物，研究表明NNK和NNN与肺癌、胰腺癌、食道癌等癌症的发生有关。TSNAs需要细胞色素P450酶（Cytochrome P450，CYP450）的介导生成与DNA反应的中间体，形成DNA加合物，从而引发突变和癌症。通过化学药物抑制或诱导使一种或几种P450酶亚型的活性发生改变，进而测定NNK和NNN代谢的变化，可间接反应特定P450酶亚型在NNK和NNN代谢中的作用。研究内容主要包括以下三个部分： 一、选用5-甲氧基补骨脂素（5-Methoxypsoralen，5-MOP）为CYP2A5酶抑制剂，吡唑为CYP2A5酶诱导剂，对小鼠体内CYP2A5酶活性进行调节，建立了 CYP2A5酶抑制和诱导两种酶活调节小鼠模型。并以香豆素为探针底物，建立了测定小鼠血液中香豆素及其代谢物的超高效液相色谱-高分辨质谱（UPLC-HRMS）法，通过测定7-羟基香豆素的生成量评估5-MOP和吡唑对小鼠CYP2A5酶活性的影响。该方法准确性好，分析效率高，测定结果与通过试剂盒检测肝微粒体中CYP2A5活性的结果相一致，5-MOP有效抑制了CYP2A5的香豆素7-羟基化，而吡唑起到了明显诱导作用。 二、通过UPLC-HRMS方法，对NNK在正常小鼠、5-MOP处置小鼠和吡唑处置小鼠的血液、肝脏和肺组织中的代谢特征进行研究，通过对比NNK各主要代谢产物在三种不同模型小鼠之间的差异，推测出 CYP2A5酶可能参与调控NNK的α-亚甲基羟基化代谢途径。同样采用高分辨质谱法，对三种小鼠体内NNN及其主要代谢物定量分析，通过对比NNN及其主要代谢物在三种小鼠体内的代谢差异，推测出CYP2A5酶可能参与调控NNN的2-羟基化代谢途径。 三、建立了一种定量分析C57BL/6小鼠组织中DNA甲基化加合物6-氧-甲基鸟嘌呤（6-O-MeG）的超高效液相色谱-高分辨质谱方法，并分别对NNK染毒后生理盐水对照组、吡唑处理组和5-MOP处理组小鼠肝脏和肺中6-O-MeG的含量进行了测定。6-O-MeG在0.05~10.00 ng/mL内线性良好（R2=0.9998），检出限0.011 ng/mL，回收率92.1％~102.2%，日内和日间精密度分别为1.10%~4.34%和1.89%~6.58%。给药4 h后，吡唑处理组小鼠肝脏和肺中6-O-MeG的含量分别为对照组的2.09和1.87倍，5-MOP处理组则分别为对照组的0.32和0.67倍，表明小鼠体内的CYP2A5在NNK的代谢活化过程中起到重要作用。