纤维素是是自然界中含量最丰富的可再生的碳水化合物，但大量纤维素资源目前并没有得到很好的利用。酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）是工业上生产乙醇的理想菌株，具有高乙醇生产能力、低pH和高乙醇浓度耐受性，能利用广泛的糖谱发酵，但不具有利用纤维素作碳源的能力。因此，通过代谢工程，使酵母能利用纤维素转化乙醇，成为目前新的热点。将绿色木霉内切葡聚糖酶Ⅲ（endo-1,4-β-D-gulcanaseⅢ, EGⅢ）和黑曲霉β-葡萄糖苷酶Ⅰ（β-glucosidaseⅠ, BGLⅠ）编码基因克隆到载体pδRCMB中，通过电转化进入酵母细胞，纤维素酶基因以δ整合的方式被整合到酵母基因组上。通过水解圈分析、酶活初步分析和酶活与时间关系分析3步筛选出高纤维素酶表达能力的重组酵母W303[BE]。运用蛋白电泳—活性染色分析重组酶在细胞内的表达情况。最后测定W303[BE]在以PASC为单一碳源的培养基中的生长和乙醇发酵能力。W303[BE]分泌的EGⅢ和BGLⅠ酶活在培养120h后分别达到最高值0.468UE/mL和1.532UB/mL。重组EGⅢ的反应最适pH和最适温度分别为pH6.0和60℃。重组BGLⅠ的反应最适pH和最适温度分别为pH4.5和60℃。在重组酵母分泌表达的蛋白中，具有BGLⅠ活性的蛋白分子量大于170kDa，而在170kDa及100kDa的片段中均发现具有EGⅢ活性。在含2g/L PASC的YP培养基中，，重组酵母的细胞干重最高达0.177g/L，乙醇浓度在培养96h达到0.53g/L，占理论值的52.0%。结果表明，W303[BE]能够在以PASC作单独碳源的培养基中生长和转化乙醇。本研究为利用纤维素物质一步发酵产生乙醇提供了新的纤维素酶表达菌株。