细胞焦亡是一种由炎症小体介导的细胞程序性死亡,在机体抵抗细菌、病毒、真菌等病原体感染过程中发挥关键作用,但过度的、失控的细胞焦亡会引起机体炎症、器官损伤甚至死亡。咖啡酸（Caffeic Acid,CA）和阿魏酸（Ferulic Acid,FA）是具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种生理活性的酚酸类化合物,在蒲公英、金银花等中草药植物内含量丰富。本研究探讨了 CA和FA对巨噬细胞焦亡反应的作用及其机制,为焦亡相关疾病的防治提供思路,并在一定程度上阐释了清热解毒类中药发挥药效的分子机制。研究方法:（1）100 ng/mL LPS 预刺激 J774A.1 细胞后,使用 12.5、25、50、100μg/mLCA、FA分别或联合处理细胞,再用10μMNigericin诱导J774A.1细胞caspase-1依赖的经典细胞焦亡,1 h后检测细胞上清液中LDH、IL-1β释放量、PI阳性细胞率。（2）100 ng/mL LPS预刺激RAW264.7以及小鼠骨髓来源巨噬细胞（Bone Marrow Derived Macrophage,BMDM）后,使用50μg/mL CA、FA分别或联合处理细胞1 h,再用FuGENE HD将2 μg/mLLPS转导入细胞内,诱导caspase-11介导的非经典细胞焦亡,16h后检测LDH、IL-1β释放量、PI阳性细胞率,观察细胞形态变化;100ng/mL LPS+10 μM Nigericin诱导J774A.细胞caspase-1依赖的经典细胞焦亡,用JC-1染色、BODIPY染色、RT-PCR等方式初步探讨焦亡细胞内线粒体膜电位变化、脂质过氧化程度、焦亡相关基因mRNA表达量的变化,并观察CA、FA对其调节作用。（3）用Western blotting、扫描电镜、免疫荧光等技术探讨CA、FA对焦亡通路蛋白的活化和细胞膜完整性的影响;分子对接方法预测CA、FA与GSDMD蛋白的结合模式。试验结果:（1）CA剂量依赖性抑制LPS/Nigericin诱导的J774A.1细胞培养上清中LDH和IL-1β释放;FA的作用效果不显著。CA与FA联用无协同作用。（2）CA对LPS转导引起的BMDM细胞膜破裂、细胞核皱缩等特征性焦亡形态变化有显著缓解作用,且显著降低了细胞上清中LDH和IL-1β的浓度;CA对LPS转导引起的RAW264.7细胞LDH释放以及PI阳性细胞率有显著抑制作用;FA对上述两种细胞的作用效果均不显著,与CA无协同作用。焦亡细胞内脂质过氧化程度升高、线粒体膜电位降低、焦亡相关基因mRNA表达量上升;CA和FA对这些变化无显著影响。（3）Western Blot结果表明CA对pro-caspase-1和pro-caspase-11的活化无显著影响,对N-GSDMD的形成有显著抑制作用;FA未显著影响GSDMD、pro-caspase-1和pro-caspase-11的活化。免疫荧光和扫描电镜结果表明,CA显著降低了 N-GSDMD在膜上的聚集以及膜孔的形成;FA作用效果不显著。分子对接预测的最佳结合模式表明,CA和FA与GSDMD的结合位点、结合能有差异:CA通过与GSDMD的Asp-22、Lys-52、Tyr-55和Arg-54残基形成氢键,在α1螺旋和β1-β2环附近与N-GSDMD结合;最低结合能为-4.91 kcal/mol。FA 通过与 GSDMD 蛋白的 Ser-34,Asn-59,Ser-61 和 lys-63 残基形成氢键,在α1’螺旋和β2折叠附近与N-GSDMD结合;最低结合能为-3.91 kcal/mol。结论:CA可通过阻碍GSDMD蛋白活化,抑制Nigericin和胞质LPS诱导的巨噬细胞经典和非经典焦亡的发生,减少细胞膜损伤和促炎因子释放;FA对细胞焦亡无明显影响,两者联合也无协同作用。