背景：　　卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，虽然发病率低于宫颈癌和子宫内膜癌，但是死亡率却居于首位，严重威胁广大女性的生命健康。卵巢癌症起病症状隐匿，随着病情的进展在后期才会出现肿瘤的典型症状，70%-80%的患者在初诊时已属晚期。卵巢癌的病情进展迅速，五年存活率只有20%-36.1%。目前，主要治疗方法是最大限度地手术切除肿瘤组织，然后接受铂/紫杉醇类药物化疗。因为传统治疗效果欠佳，复发率高，因此探索卵巢癌基因治疗的分子生物学机制以获取有效的治疗靶点，寻找新型治疗方法，对于改善卵巢癌病人的预后及降低复发率具有重要意义。　　最新研究表明，功能性小分子dsRNA不仅可以抑制基因表达，还可以通过靶向基因启动子或非编码转录，激活相关的基因转录，即RNA激活（RNAa）。小激活RNA（saRNA）是具有RNA激活的小分子dsRNA，与RNA干扰具有相反的功能。与传统RNAi相比，RNAa的使用无需考虑某一肿瘤是否具有特定致癌基因作为靶基因，其具有广泛调控性，为科研工作者攻克肿瘤癌症治疗难关打开了新思路。亦有报道称不对称小分子与靶向位点的结合有望降低脱靶率，提高作用效率。另一方面，p21基因是位于p53基因下游的细胞周期素依赖性激酶抑制因子，作为一个负性调节因子它参与减少受损DNA的复制和积累工作，发挥抑癌作用。如今许多新型药物和放射疗法等在癌症治疗中的作用都与p21有着密切的关系。在此我们针对已有较多研究支持的抑癌基因p21设计不对称的小分子激活RNA及化学修饰物进行实验，对卵巢癌细胞抑制作用进行初步探讨。　　目的：　　1、通过细胞实验，检测所合成的功能性dsRNA调控卵巢癌细胞A2780在转录水平上对p21的上调作用。　　2、通过体外实验检测所筛选出来的非对称小激活dsp21-RNA（15/21）以及经化学修饰的S-VEsaRNA和S-CHOsaRNA在转录水平上调卵巢癌细胞A2780的p21表达后，对其相关靶向基因的影响；　　3、观察p21表达水平上调后的卵巢癌细胞A2780增殖生长、克隆形成、细胞周期、侵袭能力等生物学行为的变化；　　4、初步评价非对称小激活RNA通过反义链靶向调控p21对卵巢癌细胞的抑制作用，为其应用于临床治疗提供参考。　　方法：　　1、根据已有报道中靶向定位于p21启动子上游区域的小激活RNA(dsP21-322)设计成双链碱基数目不一致的结构不对称的小RNA∶saRNA（dsp21-RNA（21/15），dsp21-RNA（15/21））和经化学修饰其中一条链的saRNA：维生素修饰5’端的AQ-VEsaRNA和S-VEsaRNA，以及胆固醇修饰5’端的AQ-S-CHOsaRNA和S-CHOsaRNA；　　2、将小分子dsP21-322及其修饰的saRNA通过细胞瞬时共转染转入卵巢癌细胞A2780，通过定量PCR检测细胞中p21表达增长情况，并通过免疫组化反应监测细胞p21蛋白表达水平变化,筛选出能有效上调目的基因的saRNA；　　3、用能有效上调卵巢癌细胞中p21的saRNA：dsp21-RNA（15/21），S-VEsaRNA和S-CHOsaRNA通过细胞瞬时共转染转入卵巢癌细胞A2780。并通过定量PCR和免疫印迹法检测dsp21-RNA（15/21）、S-VEsaRNA和S-CHOsaRNA对p21相关靶向基因(E-cadherin,cyclin D1，CDK4和CDK6)的影响；　　3、培养观察卵巢癌细胞在p21表达上调后的生长情况，通过细胞克隆形成实验观测其细胞克隆接种存活率的变化，CCK8检测吸光度计算出细胞的存活率；　　4、通过细胞流式术(flow cytometry,FCM)检测卵巢癌细胞A2780的p21水平改变对细胞周期的影响；　　5、采用Transwell实验检测dsp21-RNA（15/21），S-VEsaRNA和S-CHOsaRNA转染后卵巢癌细胞侵袭能力的改变。　　6、应用SPSS19.0软件进行统计学分析，数据结果以(X)±s表示，两组数据比较采用Fisher确切概率法和Student’s t检验，多组数据间比较采用方差分析和LSD检验，检验水准为α＝0.05，P＜0.05为差异有统计学意义。　　结果：　　1、与阴性对照相比较，dsP21-322可以有效上调卵巢癌细胞A2780中p21的RNA和蛋白水平的抑癌基因p21表达；截短后的不对称小分子dsp21-RNA（15/21）以及经化学修饰的S-VEsaRNA和S-CHOsaRNA均可以有效上调卵巢癌细胞A2780中p21的RNA和蛋白水平；　　2、蛋白免疫印迹结果显示dsp21-RNA（15/21），S-VEsaRNA和S-CHOsaRNA转染后的卵巢癌细胞A2780的E-cadherin水平上调，但细胞周期蛋白Cyclin D，CDK4和CDK6表达水平下调；　　3、转染dsp21-RNA（15/21），S-VEsaRNA和S-CHOsaRNA后的卵巢癌细胞在显微镜下可看到细胞生长情况欠佳，增殖减慢，凋亡增多；细胞克隆形成实验结果显示形成克隆数目减少，接种存活率下降；CCK8显示卵巢癌细胞的存活率在dsp21-RNA（15/21），S-VEsaRNA和S-CHOsaRNA组里是下降的；　　4、p21表达上调使卵巢癌细胞更多停留在细胞周期中的G0/G1期；　　5、过表达p21能够使穿过小室的卵巢癌细胞变少，即侵袭能力减弱。　　结论：　　1、dsP21-322及其不对称修饰的saRNA：dsp21-RNA（15/21）以及经过化学修饰的S-VEsaRNA和S-CHOsaRNA可以在转录水平上调卵巢癌细胞A2780p21的表达，其反义链起主导作用。　　2、被截断为不对称双链的小激活RNA和经化学修饰的小激活RNA不仅可以抑制p21的表达，还可以影响和p21相关基因的表达从而改变生物学活性；　　3、验证了p21作为抑癌基因，能抑制卵巢癌细胞增殖，增加细胞凋亡和阻滞细胞周期，以及减弱细胞侵袭能力。为卵巢癌治疗提供了实验依据和理论依据。