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1、目的通过构建大鼠自体原位肝移植(AOLT)模型,比较板蓝根多糖灌胃组大鼠与对照组大鼠自体原位肝移植术后早期肝脏病理改变、生化指标及TNF-α表达差异,研究板蓝根多糖对大鼠自体原位肝移植模型肝脏缺血-再灌注损伤的保护作用,分析其对肝移植大鼠肝脏功能保护作用的可能机制,为进一步探索肝移植提供实验基础。2、方法2.1清洁级SD纯系大鼠72只,雌雄不拘,随机分为3组：自体原位肝移植模型组(AOLT组n=24)；板蓝根多糖+自体原位肝移植组(RIPT组n=24)；假手术组(Sham组n=24)。两组自体原位肝移植大鼠均采用经门静脉灌注的70%自体肝移植模型,并加以技术改进施行大鼠自体原位肝移植手术,Sham组行开关腹及解剖肝周韧带及血管手术,但术中不行灌肝处理。2.2比较大鼠自体原位肝移植术后48h内的相关指标变化水平。各组大鼠均在术后1h、12h、24h及48h时间段各分别处死6只,经下腔静脉采血、分离血清,全自动生化仪检测ALT、AST等生化指标,ELISA法检测血清TNF-α,切取肝中叶作为标本制备切片,在光镜、透射电镜下观察肝细胞结构形态学改变、肝细胞线粒体及细胞器的损伤情况。3、结果3.1手术结束后,大鼠即刻苏醒,翻身,并能维持有效呼吸、心跳。经门静脉灌注,肝脏热缺血时间一般小于5秒,可以忽略。无肝期结束后,RIPT组肝脏复色均匀,色泽红润；AOLT组较RIPT组复色稍差,局部可见花斑样改变。3.2分析各组肝功能测定结果,AOLT组及RIPT组术后1h血清ALT和AST即明显升高,于术后1h、12h及24h均显著高于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05);RIPT组随着术后时间的延长血清ALT和AST逐步回落,RIPT组血清ALT和AST在12h及24h时间点检测值显著低于对应时间段AOLT组检测值,差异有统计学意义(P<0.05)。3.3光镜下术后各组肝细胞的病理变化：RIPT组及AOLT组,在术后1h观察见肝细胞肿胀明显,肝小叶结构基本正常,其中AOLT组肝细胞之间的间隙变宽,肝血窦变窄较明显,内有淤积的红细胞并见血栓形成,周围出现炎症细胞浸润；Sham组肝细胞结构正常,无炎症细胞浸,肝组织无明显改变。术后12h,RIPT组肝细胞肿胀略重,肝组织无明显改变；AOLT组肝细胞水肿加剧,肝血窦明显变窄,肝小叶结构不清,内有淤积的红细胞和血栓,周围有炎症细胞浸润。术后24h, RIPT组肝细胞肿胀稍好转,肝血窦变宽；AOLT组,肝细胞肿胀进一步加重,肝血窦继续变窄,肝小叶结构显示不清。3.4观察透射电子显微镜下各组肝细胞超微结构可见：术后1h,RIPT组大鼠肝脏线粒体肿胀较轻,椭圆形,周围内质网结构尚存；AOLT组,线粒体大小不一,明显肿胀,呈类圆形。术后12h,RIPT组大鼠肝脏线粒体肿胀略加重,内嵴部分断裂,但仍有少量排列,周围内质网结构尚存；AOLT组线粒体肿胀加剧,严重者可见线粒体嵴减少、断裂或消失,周围内质网结构破坏。术后24h,RIPT组大鼠肝脏线粒体肿胀略好转,损伤未见加剧,周围内质网结构尚存；AOLT组线粒体肿胀加剧,内有空泡样变性,可见嵴断裂或消失严重。术后48小时,RIPT组大鼠肝脏细胞基本正常,见少量核碎裂相；AOLT组见较多量核碎裂、凝固及溶解,可及凋亡小体。3.5AOLT组及RIPT组血清TNF-α于术后1h均明显升高,显著高于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05)。RIPT组血清TNF-α各时间段始终低于AOLT组,于术后1、12、24小时两者检测值差异显著,差异有统计学意义(P<0.05)。4、结论本实验采用自体原位肝移植模型,经门静脉灌肝,很好的模拟了临床上肝脏缺血-再灌注损伤的病理生理过程,避免了免疫损伤的干扰,减少了因下游脏器的缺血-再灌注损伤而受到的影响,能够相对独立的反映肝脏的缺血-再灌注损伤；板蓝根多糖灌胃预处理,能够减轻自体原位肝移植模型大鼠肝脏的缺血-再灌注损伤,其可能的机制是通过调节缺血-再灌注损伤过程中单核巨噬细胞系统的活化,尤其是肝脏Kupffer细胞的活化,抑制TNF-α等炎症介质的释放,减轻炎症细胞的浸润和对血管内皮的损伤,最终达到减轻肝脏缺血-再灌注损伤。