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动态观察糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)mRNA和蛋白在戊四氮致痫大鼠海马各区的表达变化,及其与苔藓纤维出芽关系,以探讨其在癫痫的发生发展中的作用。
方法:
清洁级SD雄性成年大鼠120只,随机分两大组:实验组(60只)和对照组(60只);实验组随机分为PTZ(30mg/kg.d,腹腔注射)第一次注射后3 d、1w、2w、4w、6w共5个亚组,每亚组12只,对照组(等容量的NS,每天1次,腹腔注射)随机分为5个亚组,每亚组12只,与实验组各时间点对应。以上各亚组再分2个小组,每小组6只大鼠,分别进行①Timm染色并评分;②GSK-3β的免疫组化和原位杂交染色并测定其相应的光密度值。
结果:
1.动物模型
PTZ致痫成功率为95.8%,死亡率为4.2%。PTZ点燃后大鼠出现痫性发作及脑电图显示痫样放电;对照组未出现痫性发作及自发性发作。
2.GSK-3βmRNA和蛋白的表达变化
实验组大鼠海马CAl、CA3、DG区GSK-3βmRNA和蛋白表达在点燃过程中逐渐增多,点燃后表达逐渐下调到正常对照组水平,在点燃前后除6w组外GSK-3β表达与对照组相应时间点比较差异有统计学意义。
3.苔藓纤维出芽(MFS)Timm银染颗粒评分
实验组CA3区在点燃前可见1-4级MFS,点燃后可见4-5级MFS,与对照组相应时间点比较差异有统计学意义;实验组齿状回内分子层可见0-1级MFS,与对照组比较差异无统计学意义。
4.CA3区GSK-3β表达变化与MFS的相关分析
癫痫点燃过程中CA3区GSK-3β表达与MFS评分进行相关分析,发现有线性正相关关系。
结论:
l.GSK-3β在海马表达变化可能在苔藓纤维出芽的过程中起着促进作用。
2.cA3区锥体细胞GSK-3 β改变在癫痫发生中的作用可能较DG区更重要。