副猪嗜血杆菌可以引起猪的格拉泽氏病，表现为纤维素性多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎和肺炎，发病特点多呈现地域特征，给全球的养殖业造成了巨大经济损失。替米考星作为大环内酯类动物专用药，对畜禽的呼吸道疾病具有很好的治疗作用。替米考星吸收速度快，半衰期长，肺部浓度高等药动学特点，进一步促进了其在兽医临床上的应用。但我国目前养殖业用药的不合理必然导致耐药现象的产生，耐药监测具有必要性和紧迫性。而耐药监测需要判定标准，目前我国并没有相关标准，主要参考CLSI中的折点，CLSI标准中并没有替米考星对副猪嗜血杆菌的折点规定。因此，为了监测耐药性产生，分析耐药现状和发展规律，更科学地指导临床用药和新药开发，本课题参考CLSI中折点制定的方法建立了符合我国国情的野生型折点和药效学折点，为折点的制定工作提供科学数据。　　1替米考星对副猪嗜血杆菌野生型折点的制定　　使用PCR方法对收集的103株副猪嗜血杆菌进行鉴定，结果全部呈现阳性，证明细菌全部为副猪嗜血杆菌。使用CLSI推荐的琼脂稀释法对103株副猪嗜血杆菌进行MIC测定，MIC50为1μg/mL，MIC90为4μg/mL。　　将测得的MIC数据进行以二为底的对数转化，并使用Sigmastat软件进行正态性检验，结果P值为0.200，符合正态分布。使用Graphpad prism软件对数据进行非线性回归拟合，当模拟值N≤16时，模拟值与真值相差0株菌，差异最小。使用NORMINV函数分别设定野生型上限的概率为99.9％和下限的概率为0.1％，得到野生型分布范围为0.015μg/mL～16μg/mL。使用NORMDIST函数分别求出高于野生型上限的概率为0.18％，和低于野生型下限的概率为0.07％。根据规定，野生型折点为野生型分布的上限，所以制定野生型折点为16μg/mL。　　2、替米考星对副猪嗜血杆菌的作用特点　　根据副猪嗜血杆菌SH0165株MIC的测定结果，分别设定1/4MIC、1/2MIC、1MIC、2 MIC、4 MIC、8 MIC、32 MIC浓度的药物与细菌进行孵育，分别在0h、1h、2h、4h、8h、12h、24 h各取0.1mL，使用稀释法进行涂板计数。在36h对平板活菌数进行计数，以活菌数的对数值为纵坐标，以时间为横坐标作图，结果表明替米考星对副猪嗜血杆菌的作用呈现浓度依赖性。　　3、替米考星在猪血浆和肺部的药动学研究　　将12头健康仔猪平均分成两组，一组用来建立血浆药动模型，一组用来建立肺部药动模型，给药剂量都为40 mg/kg，给药方式为灌胃给药。　　血浆药动组:分别在0.25 h、0.5 h、0.75 h、1h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24 h、36h、48 h、72 h、96 h采集血液2 mL，根据建立的高效液相检测方法检测血浆中药物浓度。使用Winnonlin软件对获得的药时数据进行拟合，采用的是有吸收的二室开放模型，得到的主要药动学参数:AUC24=32.10μg·h/mL，Tmax=3.50 h，Cmax=1.73μg/mL。　　肺部药动组:根据制定的麻醉方案将动物麻醉，在给药前分别采集血液2mL，给药后分别在0.5 h、2h、4h、6h、8h、12h、24 h、36h、48 h、72 h、96 h通过肺泡灌洗技术注入50 mL生理盐水，并回收肺泡灌洗液，根据建立的高效液相检测方法检测灌洗液中药物浓度。另外检测灌洗液和血浆中尿素氮的浓度，结果表明，药物经过了约10倍稀释。使用Winnonlin软件对获得的药时数据进行拟合，采用的是非房室模型，得到的主要的药动学参数:AUC24=72.59μg·h/mL，Tmax=48 h，Cmax=4.72μg/mL。　　4、替米考星药效学折点的建立　　根据肺部药动获得的6头猪的AUC24数据:47.17μg·h/mL、93.76μg·h/mL、69.06μg·h/mL、75.57μg·h/mL、63.46μg· h/mL、86.50μg·h/mL。分别计算平均值为72.59μg·h/mL，标准差为16.69μg·h/mL。根据药动学参数符合对数正态分布，使用Crystalball软件进行蒙特卡洛模拟，得出10000头份的AUC数据。将药效学目标设定为30h，分别计算不同MIC下AUC/MIC的达标率，当MIC为1μg/mL时，达标率为100％，当MIC为2μg/mL时，达标率为76％，根据规定，达标率不小于90％的最大MIC即为药效学折点，所以制定替米考星对副猪嗜血杆菌的药效学折点为1μg/mL。　　综上所述，本课题建立了副猪嗜血杆菌对替米考星的野生型折点。完善了动物肺泡灌洗技术，首次建立了替米考星在猪肺部的药动学模型。为动物肺部药动模型的建立提供了参考，为副猪嗜血杆菌对替米考星折点的建立提供了科学可信的数据。