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无乳链球菌已成为近年来罗非鱼细菌性疾病中重要的致病菌,给罗非鱼产业造成了极大的经济损失。目前引起罗非鱼链球菌病的致病菌主要有海豚链球菌和无乳链球菌。本研究对广西8个市12个县／区采集的672个罗非鱼病样进行细菌分离,并通过API20Strep试剂条及16SrRNA分子鉴定,从其中30个病样中共分离到无乳链球菌30株,其中南宁市7株、钦州市3株、北海市7株、柳州市5株、梧州市1株、玉林市7株。无乳链球菌的总检出率为4.46%。在检出的30株无乳链球菌中,有9株溶血试验呈阴性,其余21株的溶血试验呈阳性。利用BLAST分析了30株试验菌株的16SrRNA基因序列和与GenBank中已登录链球菌相应序列的同源性,结果显示,30株试验菌株与无乳链球菌(S.agalactiae)海南分离株JF423947、广东分离株JQ039375、KF111315及广西分离株JQ990156的相应序列高度同源(98.5%～100%),与海豚链球菌(S.iniae)中的EU622514株、FJ870987株,停乳链球菌(S.dysgalactiae)中的AB159678株、X59030株,化脓性链球菌(S.pyogenes)中的AB023575株、EU660335的相应序列的同源性相对较低,分别为93.4%～95.8%、88.9%～96.4%、95.3%～96.1%。30株广西分离株之间高度同源,为99.1%～100%。对罗非鱼的人工感染试验结果显示,30株菌株均为致病性菌株,但其毒力在不同菌株间均存在一定差异,GXYL2G、XYL4、GXYL6、GXYL74株菌株的致死率均为100%,致病力最强；GXNN2、GXBH1、GXBH3、 GXBH4、GXBH55株菌株的致死率均低于80%,其余21株菌株的致死率在80.0%～97.5%之间。28种药物的药敏试验结果表明,30株无乳链球菌对氨苄青霉素、菌必治、先锋必、盐酸沙拉沙星、舒普深,先锋Ⅵ、多西环素7种抗生素的敏感率均在70%以上,最高可达100%,对磺胺类药物磺胺二甲嘧啶、磺胺-6-甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶,复方磺胺嘧啶,以及庆大霉素、链霉素、复方新诺明、依诺沙星和新霉素等9种药物的耐药率均在80%以上。采用PCR方法对30株无乳链球菌的cfb、cpsE和sip3种毒力基因进行检测,结果表明,30株菌株为同一基因型cfb+cpsE+sip+。在30株无乳链球菌中,根据来源地,选取具有代表性的6株对其cfb、cpsE和sip基因进行了克隆和测序分析,结果显示,无乳链球菌广西分离株cfb、cpsE、sip基因核苷酸的同源性分别在99.1%～100%、99.6%～100%和99.5%～100%,氨基酸的同源性分别在98.8%～99.6%、100%、99.1%～100%之间。基于广西分离株的3个毒力基因遗传进化树分析,无乳链球菌广西分离株的3个毒力基因各聚在同一个群内,与国内各基因相应参考菌株JQ289564(广东)、HQ148672(广东)、HQ148671(广东)、JQ289567(海南)、HQ888682(海南)、EF694027(山东)同源性高达97.7%～100%,表明无乳链球菌广西分离株亲缘关系很近,与国内参考菌株亲缘关系也较近。