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选择昆明白雌性小鼠作为试验动物,以37℃2h条件下正常体外培养为对照,将体外培养至扩张囊胚(hCG后113h)的小鼠胚胎分别施以38℃2h、39℃2h和40℃2h的预热应激处理,然后分别将预热胚胎和对照组胚胎置于42℃高温下处理3h,以观察热休克蛋白70(HSP70)表达对高温所致胚胎损伤的影响.用Westernblot技术检测小鼠囊胚内HSP70的表达;台盼兰染色后体视显微镜观察热应激后囊胚的死亡与畸形,计算存活率。以研究小鼠囊胚的热敏性、热应激对小鼠囊胚HSP70表达的影响以及囊胚热耐受的获得与HSP70表达之间的关系,判断HSP70增量表达对胚胎抵抗高温损伤有无保护作用。试验结果如下:
1.热应激对囊胚存活率的影响
38℃2h、39℃2h和40℃2h不同温度热应激处理各组囊胚存活率(分别为83.01%、69.11%和63.51%)均低于对照组(94.01%)。39℃2h和40℃2h与对照组相比差异极显著(P<0.01),38℃2h与对照组之间差异显著(P<0.05);囊胚存活率在39℃2h和40℃2h组间无显著差异(P>0.05)。
2.诱导热应激对囊胚存活率的影响
在不同温度诱导热应激组中,先经38℃2h、39℃2h和40℃2h预热应激处理,再经42℃高温处理3h后囊胚的存活率(25.16%、36.37%和22.81%)均高于直接42℃3h热应激组(13.07%)。其中39℃热诱导2h囊胚存活率为最高(36.37%),与直接42℃3h热应激处理组(13.07%)相比差异显著(P<0.05).在39℃不同时间诱导热应激组中,先经39℃3h热诱导,再经42℃3h热应激后囊胚的存活率(38.81%)极显著(P<0.01)高于对照组(15.15%).39℃1h和39℃2h热诱导组存活率(32.81%和34.92%)显著(P<0.05)高于对照组(15.15%),但39℃1h和39℃2h热诱导组之间差异不显著(P>0.05)。
3.不同温度预热应激对囊胚HSP70表达的影响
经Westernblot检测,38℃2h,39℃2h和40℃2h预热应激组内囊胚HSP70表达量较37℃对照组均增加。39℃热应激处理2h囊胚HSP70表达量(0.839)极显著(P<0.01)高于对照组(0.781);38℃热应激处理2h和40℃热应激处理2h囊胚HSP70表达量(0.806和0.810)也显著(P<0.05)高于对照组(0.781),
4.不同时间预热应激对囊胚HSP70表达的影响
选39℃作为最佳诱导温度,对胚胎进行不同时间预热应激处理。Western blot检测可见39℃1h、39℃2h和39℃3h的预热应激处理组均有HSP70的表达,其中39℃热应激3h表达量最高,与对照组相比差异极显著(P<0.01),39℃1h和39℃2h组也显著(P<0.05)高于对照组。