神经干细胞（neural stem cells，NSCs）是当今生命科学研究的热点之一。NSCs治疗应用主要体现在：细胞移植治疗、细胞替代和基因治疗及其自我修复治疗。随着NSCs研究的深入，发现NSCs移植后在炎症反应、氧化应激较重的微环境下NSCs的存活率均较低。实验目的：观察NSCs在氧化应激状态下是否有自噬的发生，为研究神经干细胞在氧化应激状态下的生存机制提供新的依据。实验方法：分离、培养Wistar孕鼠的神经干细胞，对生长良好的神经干细胞球进行Nestin免疫细胞化学染色。应用免疫细胞化学技术对神经干细胞分化情况进行鉴定。应用MTT法检测不同浓度H₂O₂对NSCs生存率的影响，计算神经干细胞的生存率。通过吖啶橙（AO）染色观察细胞内酸性自吞噬空泡的积聚。应用透射电子显微镜对比观察各组NSCs超微结构的变化。通过Western blot技术检测各组LC3蛋白的表达情况。实验结果：我们成功的分离、培养了NSCs；MTT比色法结果显示，不同剂量H₂O₂作用于NSCs12h或24h后，随着H₂O₂浓度的增加，细胞生存率逐渐降低，并呈剂量时间相关性，而0.5mM、1mM H₂O₂组与对照组相比具有统计学意义。与对照组相比，0.5mM H₂O₂组AO染色结果可见红色荧光阳性结果显著增强，细胞酸性自吞噬空泡产生明显增多。0.5mM H₂O₂作用于NSCs12h后，应用透射电子显微镜检测自吞噬空泡的形成。结果显示，对照组NSCs表现为正常细胞形态，细胞核呈规则圆形。0.5mM H₂O₂作用后细胞体积变大，细胞膨胀，有明显的自吞噬空泡生成。0.5mM H₂O₂作用于NSCs12h后，通过Western Blot检测LC3蛋白表达。结果表明，与对照组相比，0.5mM H₂O₂作用后LC3-Ⅱ蛋白表达明显增强。结论：氧化应激可以通过一些通路来诱导神经干细胞自噬的发生，这为探讨神经干细胞生存与死亡机制的研究提供了新的理论依据。