杉木EST-SSR标记的开发与应用

来源 :浙江农林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tianxiaowei2030
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杉木(Cunninghamia lanceolata(Lamb.) Hook.)是我国南方重要的速生用材树种。为了开发有效的分子标记,用于杉木遗传多样性和分子辅助育种的研究与应用,本研究分析杉木转录组序列的SSR分布情况,设计其相应的EST-SSR引物,并利用筛选出的多态性引物对来自11个原产地的150株杉木无性系进行基因型分析。在EST-SSR位点连锁不平衡和供试材料群体结构分析的基础上,利用TASSEL软件,对获得的分子标记与杉木无性系的3个重要表型性状进行关联分析。实验主要研究结果如下:(1)杉木无性系生长材性相关性状的系统分析表明,150个无性系的基本密度一般分布在0.3123-0.3454g.cm-3之间,心边材比值大多数分布在1.9824-3.0652之间,胸径在21.22-27.02cm之间。对杉木个体间及11个原产地间的生长材性相关性状分别进行方差分析。结果得出:杉木心边材比值在个体间差异不显著,而胸径和基本密度在个体间差异显著;在11个原产地间,胸径和心边材比值差异显著,而基本密度差异不显著。(2)利用MISA软件对83248条杉木转录组序列进行SSR位点的发掘,其中含SSR位点的序列7129条,SSR位点8628个,发生频率为8.36%,三核苷酸重复是最主要的SSR类型,占56.88%。105对引物的筛选结果显示,95对EST-SSR引物能扩增出理想的PCR产物,其中有30对引物揭示出多态性。(3)30对多态性引物扩增获得的等位基因数最多为6个,最少为2个,平均等位基因数为2.47。30个微卫星标记的多态性信息含量(PIC)为0.0134-0.4752,平均为0.3074。POPGENE结果表明150个杉木无性系的有效等位基因平均数为1.5350,Shannon多样性指数为0.5120。群体遗传结构分析将150个杉木无性系划分为4个亚群。通过关联分析,发现有1个与密度显著关联的位点。这些研究结果表明,利用杉木EST序列开发的EST-SSR引物能够应用于杉木的遗传多样性分析,相关的分子标记将为杉木的分子辅助育种提供基础。
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