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骨质疏松(Osteoporosis，OP)作为目前患病率非常高的一种疾病，常见于中老年人。骨质疏松在世界性多发病位于前十名，全球 OP患者已经超过2亿人，我国的患病人口预计也将于21世纪中叶超过2亿人。OP给人类的健康带来严重威胁，同时也加重了人们的经济和思想负担。OP的防治是全人类的课题，特别是预防，是当下一个重要的研究方向。 我国畜禽养殖业发达，鹅骨通常被粗加工成骨粉、骨糊等，资源得不到合理高值的利用，有些甚至直接被丢掉，造成了经济损失。胶原蛋白和胶原多肽的研究较深入，生理功能非常丰富，对骨质疏松有一定的防治作用，但至今还没有有关鹅骨胶原蛋白及肽对骨质疏松作用的研究报道。 本实验从鹅骨中提取胶原蛋白和胶原多肽，并用其培养 SD大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)，检测其向成骨细胞(Osteoblast，OB)分化的程度，利用细胞生物学和分子生物学技术探讨了鹅骨胶原蛋白及胶原多肽抗骨质疏松的作用机理。 一、对鹅骨进行预处理，然后分别用胃蛋白酶和胰蛋白酶在不同的条件下提取鹅骨大分子胶原蛋白和小分子胶原多肽，分别用紫外光谱、傅里叶红外光谱、热稳定性和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对提取的胶原蛋白和多肽进行了测定。结果证实所提取的胶原蛋白和肽纯度较高，胶原蛋白为典型的I型胶原蛋白，结构完整，分子量较大，肽分子量在30kDa以下。 二、通过研究鹅骨大分子胶原蛋白、含钙大分子胶原蛋白、小分子胶原多肽、含钙小分子胶原多肽对大鼠 BMSCs增殖及向成骨分化的影响，阐述了鹅骨胶原蛋白和胶原多肽对骨质疏松的作用机理。采用 MTT(噻唑蓝)法测定鹅骨胶原蛋白及胶原多肽对 BMSCs增殖的影响；碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)染色、ALP活性检测、茜素红染色检测分析 BMSCs成骨分化能力。结果发现，和对照组比较，试验组可促进 BMSCs的增殖，第14d ALP染色试验组ALP染色阳性率显著高于对照组(p<0.05)，第7d和第14d鹅骨胶原蛋白及肽可显著提高 ALP的活性表达(p<0.05)，第21d茜素红染色发现：试验组钙结节个数与对照组的相比较显著增加(p<0.05)。由此表明，大分子胶原蛋白、含钙大分子胶原蛋白、小分子胶原多肽、含钙小分子胶原多肽均可促进 BMSCs的增殖及向成骨细胞分化，以含钙小分子胶原多肽作用效果最佳。 三、分别在第3、6、9、12、14d通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞培养上清液中骨钙素/骨钙蛋白(Osteocalcin，OCN)、骨形成蛋白-2(Bone morphogenetic protein2，BMP-2)、I型胶原蛋白(Type I collage，Col I)、骨桥蛋白(Osteopontin，OPN)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor2，Runx2)五种成骨分化相关因子的分泌量，发现骨钙素、骨形成蛋白-2、I型胶原蛋白、骨桥蛋白、Runt相关转录因子2分泌量试验组显著高于对照组(p<0.05)，并且以含钙小分子胶原多肽促进分泌作用最佳。 四、对培养到第14d的细胞进行 RNA提取，再反转录成 cDNA，然后通过RT-PCR技术，检测成骨分化相关基因 BMP-2、OSX、Runx2及 TGF-β1基因表达水平的变化，分别使 BMP-2基因的表达水平上调了1.6599倍、1.9600倍、2.9432倍、4.2588倍，OSX基因表达上调了2.2503倍、2.1735倍、2.5560倍、3.0526倍，Runx2基因表达上调了3.4791倍、4.0283倍、5.9935倍、6.1347倍，TGF-β1基因表达上调了6.5904倍、6.9512倍、8.6148倍、9.6983倍。BMP-2、OSX、Runx2、TGF-β1等基因表达水平均得到了显著提高(p<0.05)，证明鹅骨胶原蛋白和多肽可提升成骨分化相关基因表达量，促进 BMSCs向成骨细胞分化。