生殖医学的基础与临床研究

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通过将成年人的睾丸mRNA或胎儿期的mRNA与人类睾丸cDNA基因芯片(包含9216个克隆)杂交,克隆一个新的人类睾丸特异性基因,NYD-SP12(GenBank登录号:AF345909)。其全长为2070bp,开放阅读框为1707bp,编码569个氨基酸的蛋白。 BLASTnr显示其存在小鼠同源基因(AK014869),其核酸和蛋白质同源度分别达到88%和77%。芯片杂交强度在成年人睾丸中要比胎儿期睾丸中高出30倍;同样地,荧光半定量RT-PCR揭示小鼠睾丸NYD-SP12同源基因在幼年期和成年后的表达水平也具有相同的变化趋势。 对人不同组织的分析表明,NYD-SP12特异性地在睾丸中表达。在生精障碍患者的睾丸中,NYD-SP12的表达显著降低甚至消失。原位杂交试验揭示出NYD-SP12基因的表达只限于生精上皮而不在间质细胞中表达。免疫组化实验也证明NYD-SP12蛋白在精原细胞后各级生精细胞均有表达。 用SMART软件对NYD-SP12进一步分析发现,这段蛋白的C端有一个SCOP结构域,同时还提示其C端氨基酸(466-533aa)与小鼠的Male-enhanced antigen-2(Mea2)同源。用GeneRunner和ScanProsite软件分析发现NYD-SP12具有一串磷酸化位点,这些磷酸化位点可与PKC、CK及cAMP/cGMP依赖性激酶相互作用。 值得注意的是,观察显示GFP-NYD-SP12融合蛋白定位在高尔Partl 南京医科大学博上学位论文基器上,精子的免疫组化实验在顶体部位也观察到阳性信号。 综上,所有结果表明 N-YDSN 2 参与了精子生成,并提示NYDSP编码的蛋白位于高尔基复合体上,可能在顶体形成和受精过程中发挥着某种作用。
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