紫花苜蓿是优良的豆科牧草,具有蛋白含量高、适口性强、产量高等优点。我国西北地区是紫花苜蓿主要的种植区域,但是由于紫花苜蓿在西北地区经常受不良环境的影响,极大的影响了其产量与品质。因此获得品质更加优良、抗逆性更强的紫花苜蓿品种对推动我国苜蓿种植业发展具有举足轻重的作用。由于传统的育种手段效率低,对紫花苜蓿产量和品质的改良并没有很大突破。转基因技术具有效率高、目的性强等优点,并且已经在多种植物上取得了瞩目的成就,因此利用分子手段对苜蓿抗逆性进行改良是十分有效的办法。本研究通过同源克隆的方法克隆了紫花苜蓿植物过氧化物酶MsPrx基因,并对该基因及蛋白序列进行了分析,对其分子功能进行了推测;通过实时荧光定量技术对MsPrx基因的不同组织以及NaCl、ABA处理后的基因表达水平进行了测定和分析;通过构建瞬时表达载体对MsPrx基因进行了亚细胞定位;构建了超表达载体并通过组织培养获得了T0代转基因烟草为后续进一步的研究提供了试验材料。主要研究成果如下:1.根据蒺藜苜蓿中植物过氧化物酶基因序列设计引物,利用RACE法获得紫花苜蓿中过氧化物酶基因MsPrx。经过序列分析表明该基因全长1190bp,其中CDS区963bp,编码320个氨基酸。蛋白序列分析表明该蛋白具有信号肽结构,亚细胞定位预测为分泌途径,因此MsPrx蛋白是分泌性过氧化物酶,属于Class III植物过氧化物酶家族。2.通过实时荧光定量PCR分析发现MsPrx基因在苜蓿根、茎、叶中均有表达,但在叶中表达量最高,根中表达量次之,茎中表达量最少。NaCl、ABA处理后MsPrx在根、茎、叶中的表达量均呈现先下降后增加的趋势,表明ABA可能作为信号因子调控MsPrx基因在NaCl胁迫下的表达。3.克隆MsPrx完整的CDS区序列,去掉终止密码子后插入到pCAMBIA1302-mGFP载体中,完成瞬时表达载体MsPrx-GFP的构建。利用烟草叶片进行亚细胞定位。结果表明MsPrx基因定位在高尔基体中,因此在植物抵抗胁迫方面可能具有重要作用。4.构建过表达载体pCAMBIA1302-MsPrx并利用农杆菌介导法转化烟草。经过PCR鉴定转基因成功的烟草,为进一步的试验提供了可靠的试验材料。