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人脑胶质瘤是颅内最常见的原发性肿瘤,目前针对胶质瘤患者的治疗,虽然给予积极的手术、放、化疗等治疗措施,但患者预后仍较差,且复发率极高。研究表明,WHO分级3级的胶质瘤患者平均生存期约3-5年,多形性胶质母细胞瘤(WHO分级4级)患者平均生存期尚不足1年,因此,在手术切除肿瘤同时寻找新的辅助疗法才能使胶质瘤治疗产生本质进步。近年来,人们提出了胶质瘤干细胞概念,即肿瘤组织中存在的,极为少量的干细胞样细胞,它们具有不断分裂、自我更新,多向分化能力,在肿瘤细胞的形成和生长中起到重要作用,而区别于其他大多数肿瘤细胞的分化、凋亡过程。 Singh等研究者于2003年应用无血清培养基从胶质瘤细胞中分离出具有神经干细胞性质的CD133阳性细胞——脑肿瘤干细胞(brain tumorstem cell,BTSC),发现这类细胞具有明显的自我更新、分化和增殖能力,在体外诱导培养时可分化形成肿瘤细胞,与从肿瘤患者中分离的肿瘤细胞表型相似。目前脑肿瘤干细胞理论认为肿瘤的异质性决定肿瘤内存在有少量具有干细胞属性的肿瘤细胞,通过对称性分裂形成子代干细胞,不对称性分裂形成子代干细胞和肿瘤前体细胞,随着干细胞池的逐渐扩大而形成脑肿瘤,并表达脑肿瘤干细胞特征性标志物CD133,因此理论上神经上皮肿瘤中CD133阳性细胞率代表着脑肿瘤干细胞在异质性肿瘤组织内部的含量。CD133可以作为胶质瘤干细胞特异性标记物之一,引起越来越多研究者的注意。 目的:本研究拟通过免疫组织化学染色方法观察CD133在不同级别人脑胶质瘤组织中表达情况,为脑胶质瘤的诊断、病理级别评估提供理论依据。 方法: 1.收集标本:标本来源于2010~2013年河北医科大学第二医院神经外科术中切除、经两名病理诊断医师确诊的52位脑胶质瘤患者,其中男28例,女24例;年龄18~71岁,平均(42.5±8.1)岁。肿瘤组织按WHO2007年中枢神经系统肿瘤分级标准:第一组,Ⅰ~Ⅱ级(低级别)胶质瘤组19例,第二组,Ⅲ~Ⅳ级(高级别)胶质瘤33例。患者均为初次手术且术前均未接受放疗、化疗、免疫治疗及生物治疗,另外,取11例脑外伤患者行内减压脑组织标本作为正常对照。 2.用HE染色进行胶质瘤病理级别分级,术中胶质瘤组织进行石蜡包埋、常规HE染色,光镜下观察。 3.应用零下70度液氮速冻术中所获新鲜胶质瘤组织,提取胶质瘤组织总蛋白,采用Western Blot方法检测高级别脑胶质瘤、低级别脑胶质瘤及正常脑组织标本中CD133蛋白表达。 4.免疫组织化学方法检测人脑胶质瘤中CD133蛋白的表达,取一部分术中标本用4%多聚甲醛进行浸泡固定,留用行CD133免疫组织化学染色,根据胶质瘤细胞CD133染色程度进行分级,(+++),>60%的肿瘤细胞有阳性着色;(++),30%-60%的肿瘤细胞阳性着色;(+),<30%的肿瘤细胞阳性着色;(-),没有阳性细胞。 5.统计学分析:通过数码医学图像分析系统Motic Med6.0对结果进行测定,Image J分析软件半定量分析Western Blot结果,结果采用单因素方差分析;卡方检验分析比较CD133免疫组织化学染色结果,统计数据采用SPSS13.0进行统计学处理,以P<0.05表示有统计学意义。 结果: 1.在52例胶质瘤组织中,HE显色结果证实所选的胶质瘤样品分级及类型与患者病理诊断相一致。 2.Western Blot结果显示,高级别脑胶质瘤组织中CD133含量高于低级别脑胶质瘤,具有统计学差异(P<0.05),而在正常脑组织中不表达。 3.进行CD133免疫组织化学染色显示,阳性表达着色于细胞膜和细胞浆。其中Ⅰ~Ⅱ级的阳性表达率为84.6%(16/19),Ⅲ~Ⅳ级的阳性表达率为87.9%(29/33),正常脑组织中未见CD133表达。 结论:CD133表达能够反应胶质瘤分级指标之一,对于评估胶质瘤良恶性质及判断胶质瘤患者预后具有一定指导意义。