目的：Th淋巴细胞可以分化成Th1、Th2两种细胞亚群，每种细胞亚群均有特异的功能和细胞因子。IFN-γ是Th1特征性细胞因子，IL-4是Th2细胞相应的特征性的细胞因子，另外Th2细胞还分泌IL-5、IL-6、IL-9、IL-13，但不生成IFN-γ。对于不同的免疫刺激或细胞因子，这两种Th细胞可增高并形成免疫调控环路，即Th1细胞分泌的细胞因子可抑制Th2细胞的活性，反之亦然。这种调控环路的破坏可能是引起哮喘的关键所在，有足够的证据表明，IL-4、IL-5及IL-13的释放增加和IFN-γ释放减少，反映出哮喘发病机制中的一种学说，即Th1／Th2失衡学说。研究证实，新生Th细胞分别在IL-12和IL-4诱导下分化为Th1和Th2细胞的过程中，相应地受到转录因子T-bet和GATA-3的调节。CpG ODN为含有非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸（CpG）结构的寡聚脱氧核苷酸，能够诱导Th1型免疫反应并抑制Th2型免疫应答。早期气道重塑是支气管哮喘的重要病理特征之一，以嗜酸性粒细胞为主的多种炎性细胞的浸润，导致上皮细胞损伤和脱落，损伤后的上皮细胞可释放成纤维细胞活化因子，诱导上皮下成纤维细胞聚集和活化，其最为重要特点是：能够诱导和转分化为表达α-平滑肌动蛋白（α-SMA）的肌成纤维细胞，α-SMA是肌纤维细胞亚类之一，具有收缩潜能和较强的胶原合成能力；此类转变表型的肌成纤维细胞是肺内胶原合成的主要细胞，它的聚集可促进胶原等细胞外基质的过度沉积，尤其是细胞外基质中的Ⅰ型胶原；α-SMA的增多导致管腔收缩，同时Ⅰ型胶原的沉积促使管壁增厚和僵硬，二者是早期气道重塑中重要的指标，因此，研究肺组织中α-SMA和胶原含量表达变化，可以估计气道重塑的程度。研究证实T-bet低表达和GATA3高表达小鼠表现出与哮喘相类似的气道重塑特征，说明在早期的气道重塑中，T-bet／GATA3比率的失衡可能是促进上皮下纤维化和胶原沉积的重要原因。本研究拟探讨哮喘患者PBMCs中转录因子T-bet／GATA-3的比率与Th1／Th2细胞失衡的关系，并观察体外CpG ODN干预后T-bet／GATA3比率的变化及其对Th1／Th2平衡的调节作用；同时，观察大鼠哮喘模型，肺内转录因子T-bet／GATA-3的mRNA和蛋白表达水平，以及肺支气管α-SMA和肺内成纤维细胞中Ⅰ型胶原等气道重塑相关指标的表达水平，进一步描述T-bet／GATA3比率与早期气道重塑的关系。因此，寻求T-bet／GATA-3的表达平衡点，采用CpG ODN干预，恢复Th1／Th2细胞平衡，及早阻断气道重塑的进程，可能为支气管哮喘的发病机制研究和治疗提供新的更为有效的措施。方法：第一部分：（1）抽取30例发作期哮喘患者（哮喘组）、20例慢性阻塞性肺病患者（COPD组）及20例正常人（对照组）外周静脉血6ml，各加EDTA 0.8mL抗凝，离心分离出血浆冻存待测，同时按密度梯度离心法分离PBMCs。采用RT-PCR法测定各组PBMCs中T-bet mRNA和GATA-3mRNA的表达强度，ELISA法测定血浆中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的水平。（2）抽取20例发作期哮喘患者外周静脉血10ml，各加EDTA 1.2mL抗凝，按密度梯度离心法分离出的PBMCs分为两部分，一份加入CpG ODN和PHA培养48h（CpG组），一份仅加入PHA培养48h（空白组），培养后分别收集上清液和细胞沉淀，采用RT-PCR法测定细胞沉淀中T-bet和GATA-3的mRNA的表达强度，ELISA法测定上清液中IL-4、IL-5、IL-13和IFNγ的表达水平。第二部分：健康WT（wistar）大鼠（山东大学试验动物中心，SPF级）30只，雌雄不拘，6-8周龄，体重（200±50）g，置于同一饲养室内，自由饮水和摄食。将大鼠随机分为空白对照组（Blank Group）、生理盐水组（Saline Group）、OVA组（OVA Group，哮喘模型组）各10只。采用实时定量-聚合酶链反应（Quantitative Real-time PCR）法测肺组织中T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的表达强度，免疫印迹法（western blotting）测肺组织中T-bet和GATA-3蛋白的表达强度。分离各组肺成纤维细胞，传至3-4代后，采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定成纤维细胞提取物中Ⅰ型胶原的表达强度。免疫组化法测定肺组织中α-SMA的表达水平，以及分别比较T-bet和GATA-3 mRNA和蛋白的比率变化与α-SMA和Ⅰ型胶原的变化关系。统计学分析：所有数据均以均数±标准差（（?）±s）表示，采用SPSS10.0软件处理。样本间均数的比较采用t检验，变量间的关系采用直线相关分析。P＜0.05表示有统计学意义，P＜0.01表示有显著统计学意义。结果：1．哮喘组PBMCs中T-bet mRNA的表达强度较COPD组及对照组显著减弱（P＜0.05），而GATA-3 mRNA的表达强度较其他两组显著增强（P＜0.05）；COPD组PBMCs中T-bet mRNA的表达强度较对照组增强（P＞0.05），GATA-3mRNA的表达强度较对照组减弱（P＞0.05）。2．哮喘组血浆中IL-4、IL-5和IL-13的水平较COPD组及对照组均显著增高（P＜0.05）；IFN-γ的水平较COPD组显著降低（P＜0.05），也较对照组降低（P＞0.05）。3．COPD组血浆中IFN-γ的水平较其他两组显著增高（P＜0.05），IL-13的水平较其他两组显著降低（P＜0.05）。而IL-4和IL-5的水平相应地较其他两组降低（P＞0.05）。4．哮喘组T-bet／GATA-3的比率较COPD组及对照组显著降低（P＜0.05）。COPD组T-bet／GATA-3比率较对照组增高（P＞0.05）。5．T-bet mRNA的表达强度与IFN-γ的水平成正相关（r=0.675，P＜0.05），与IL-4、IL-5和IL-13的水平成负相关（r=-0.780，r=-0.664，r=-0.546，P＜0.05）。6．GATA-3 mRNA的表达强度与IFN-γ的水平成负相关（r=-0.446，P＜0.05），与IL-4、IL-5和IL-13的水平成正相关（r=0.518，r=0.393，r=0.350，P＜0.05）。7．T-bet／GATA-3的比率与IFN-γ的水平成正相关（r=0.833，P＜0.05），与IL-4、IL-5和IL-13的水平成负相关（r=-0.779、r=-0.631，r=-0.584，P＜0.05）。8．CpG组上清液中IL-4、IL-5和IL-13的水平分别较空白组显著降低（P＜0.05），IFN-γ的水平较空白组显著（P＜0.05）。9．CpG组的细胞沉淀中T-bet mRNA的表达强度较空白组显著增强（P＜0.05），GATA-3 mRNA的表达强度显著减低（P＜0.05）；T-bet／GATA-3的比率较空白组显著增高（P＜0.05）。10．OVA组肺组织中T-bet mRNA的表达强度较空白对照组和生理盐水组显著减弱(P=8.317×10^-8，P=8.487×10^-6)；而GATA-3 mRNA的表达强度较其余两组显著增强(P=2.2×10^-16，P=2.3×10^-16)；T-bet／GATA-3的比率较其余两组显著减弱(P=7.748×^-07，P=9.645×^-06)。空白对照组和生理盐水组二者之间差异无显著性（P=0.1307，P=0.605，P=0.056）。11．OVA组肺组织中T-bet蛋白的表达强度较其余两组显著减弱(P=1.433×10^-14，P=4.926×10^-7)；而GATA-3蛋白的表达强度较其余两组显著增强(P=2.149×10^-10，P=4.409×10^-9)；T-bet／GATA-3的比率较其余两组显著减弱(P=2.287×^-08，P=2.969×^-06)；空白对照组和生理盐水组二者之间差异无显著性（P=0.4987，P=0.6077，P=0.7859）。12．OVA组肺中支气管的α-SMA的表达较其余两组显著增强(P=8.447×10^-3，P=7.883×10^-3)。13．OVA组的成纤维细胞（LF）提取物中的Ⅰ型胶原含量显著高于其余两组(P=1.603×10^-6，P=1.458×10^-6)。14．T-bet／GATA-3的mRNA和蛋白的比率与α-SMA的水平呈负相关的r值分别为（r=-0.8274，r=-0.9783）(p=3.742×10^-6，p=6.905×10^-6)，与Ⅰ型胶原的水平亦呈负相关的r值分别为（r=-0.779，r=-0.9449）(P=3.811×10^-8，P=1.603×10^-6)。结论：1．T-bet／GATA-3比例是评价支气管哮喘患者Th1／Th2失衡更为准确的指标。2．CpG ODN可以通过调节T-bet／GATA-3比例，逆转Th1／Th2失衡，在上游水平抑制哮喘的炎症反应。3．T-bet／GATA-3比例失调是导致支气管哮喘早期气道重塑指标α-SMA和Ⅰ型胶原高表达的关键因素。