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目的：1 谷氨酸脱羧酶的免疫干预NOD小鼠糖尿病的确定 2 谷氨酸脱羧酶对NOD小鼠的量效观察及其机理的探查 3 谷氨酸脱羧酶对NOD小鼠不同周龄发病的影响 方法： 实验一 将3周龄20只体重10±09g NOD小鼠分为4组分别腹腔注射谷氨酸脱羧酶(GAD)3mu、GAD3mu+IFA50μl、IFA50μl、PBS50μl，定期做糖尿病检测，动态观察各组糖尿病发生发展的过程。根据发病率来确定免疫干预药物，经过实验后GAD3mu+IFA50μl发病率最低，效果最好，所以GAD3mu+IFA50μl为下一步实验研究对象。 实验二 将确定免疫干预药物GAD3mu+IFA50μl作为观察对象，探测GAD与NOD小鼠糖尿病的量效关系，将3周龄体重10±0.9g糖尿病小鼠40只随机分为4组，第一组为GAD0.03+IFA50μl，第二组为GAD3mu+IFA50μl，第三组为GAD0.3mu+IFA50μl，第四组PBS对照组。定期检测血糖，眼内眦取血分离血清。到28周时，全部处死，取脾、胸腺作淋巴细胞亚群测定，胰腺作病理组织学观察。 实验三 由于NOD小鼠3周龄时，开始出现自身抗原GAD，8周龄时达高峰，随后降低。为探讨GAD3mu+IFA50μl对不同周龄NOD小鼠糖尿病的影响，将3周龄的糖尿病小鼠40只随机分为4组，第1组在3周龄时腹腔注射GAD3mu+IFA50μl，第2组在8周龄时腹腔注射山厄叮医科大学布皿创匕学位卡仑文GAD3mu+IFAS印1，第3组在12周龄时腹腔注射GAD3mu+正A50州，第4组PBS对照组。动态观察血糖、尿糖，并且眼内毗取血分离血清。28周龄时全部处死，取脾、胸腺检测淋巴细胞亚群的变化及胰腺作病理组织学检测。 采用双抗夹心法测定血清中细胞因子的变化，应用流式细胞仪测定淋巴细胞亚群的变化，并采用普通HE染色观察胰腺病理组织学改变。实验血糖、血清中细胞因子含量资料采用SAS软件作等时间距重复测量处理。T淋巴细胞亚群和胰岛病理学检测采用单因素方差分析，另外胰岛炎评分采用SAS非参数检验。结果: 1.通过对实验一血糖资料的分析，发现GAD3mu十IFA50川对NOD小鼠有稳定血糖的作用，各个时间点血糖无差别，并且与其他处理组有显著差异。3周龄时对NOD小鼠腹腔注射GAD3mu十丁A50川，对其糖尿病的发病有明显干预作用，可以作为本实验的研究对象。 2.实验二GAD各剂量组的血糖研究发现第2组GAD3mu+IFAS卯l，具有维持NOD小鼠血糖稳定，并且第2组在12周龄时与其他剂量组有差别。第2组NOD小鼠血清中细胞因子水平，IL一4在13周龄时比其他剂量组显著升高(P<0.05)，最后到28周时各剂量组无差别。血清中Y一IFN水平，2组增加比其他剂量组缓和，28周时2组均值比其他剂量组值显著降低(P<0.05)。2组胸腺淋巴细胞亚群分析CD4+/CDS+比例为2.34士O，21，相对的CD4+细胞所占比例最小(P<0.05);脾淋巴细胞亚群分析，2组在各剂量组中CD矿/c DS十比例为1.91士0.犯，比值最小(P<0.05)。胰腺病理切片观察，2组胰岛个数最多7.88士1.22个/张，而且胰岛炎评分最低。从中说明2组通过调节淋巴亚群变化以至血清中细胞因子变化，来维持NOD小鼠血糖的稳定性。 3.实验三探讨GAD3mu+IFA50川对各周龄的NOD小鼠糖尿病的影响，发现第1组胰岛个数最多，胰岛炎评分最低。GAD在NOD小鼠抗原未出现前诱导T细胞耐受，可能产生TS抑制性淋巴细胞。在胸腺中，第1组CD4+阳性细胞所占比例最小，于第2组有显著差异，而于第3组无差异;CDS+细胞在各组无显著差异;CD4+/C DS+比率在各组有显著差异。在脾脏中，CD4+细胞各组间无差别，CDS+细胞各组间有显著性（P＜0．05人血清中IL＊水平，总趋势增加，各组之间有差异。YJFN水平第1组比其他组显著降低，到28周时第1组于第2组YJFN水平无差别。从以上说明GAD对NOD小鼠糖尿病的作用受自身GAD表达水平的影响，通过调节淋巴细胞亚群变化以及分泌 Thl和 ThZ类细胞因子来调节血糖。结论： 谷氨酸脱校酶（GAD）早期可以对NOD小鼠糖尿病的发生进行调节。GAD3mu＋IFA50…剂量组对NOD小鼠糖尿病的免疫干预效果最好，主要是通过调节胸腺，脾淋巴细胞亚群分类，并且通过淋巴细胞分泌Th．1类因子和 Th－2类因子来调节Tho细胞的转化，从而抑制NOD小鼠胰岛炎，胰岛p细胞破坏减少，最终GAD免疫干预NOD小鼠糖尿病的发生。GAD3mu＋IFA50…对各周龄组的影响。由于GAD自身抗原在3周龄时开始出现，8周龄时达最高峰，随后降低。本实验三采用3周龄，8周龄，12周龄，3个周龄组观察，发现单体 GAD在 3周龄组主要是通过诱导ThZ类团于表达增加，抑制Th类因子表达，促进CDS”阳性TS细胞比率增加。8周龄组是通过单体GAD封闭自身反应性淋巴细胞，导致 Thl类因子分泌减低，Th－2类因子分泌相对增加。12周龄组是自身抗原GAD经过8周时表达高峰，再次注射GAD对已经活化的自身反应性淋巴细胞作用不大，对其分泌细胞因于的调节作用不明显。但比对照组ThZ类细胞因子增加。总的看来，谷氨酸脱校酶在早期适宜的剂量腹腔注射可以免疫干预NOD小鼠糖尿病的发生。