玉米ZmPP6C基因的克隆及其响应光和胁迫处理的表达分析

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丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶6亚基(catalytic subunits of Ser/Thr protein phosphatase 6,PP6C)是PP6全酶的催化亚基。在模式植物拟南芥中的研究表明,PP6C参与生长素极性运输、脱落酸信号转导和光信号转导途径介导的开花调控。本研究采用RT-PCR方法克隆了ZmPP6C基因,分析了蛋白结构特征与同源蛋白间的进化关系,利用定量PCR的方法分析了ZmPP6C基因对不同光质、黑暗到各种光质转换、长日照和短日照处理,以及胁迫处理下的表达模式,结果如下:1.蛋白磷酸酶6亚基的氨基酸序列在进化上高度保守。序列分析表明,ZmPP6C基因开放阅读框为912个核苷酸,编码303个氨基酸残基,包含PP2A的催化亚基PP2Ac结构域;系统进化树分析表明,PP6C蛋白在进化上较为保守,无论是单子叶植物还是双子叶植物,氨基酸序列高度相似,可达91%。并且与高粱的PP6C蛋白相似性更高,高达99.67%。2.ZmPP6C基因在玉米叶片中表达量较高,并且响应不同光质处理。对玉米自交系B73的ZmPP6C基因进行器官特异性表达分析表明,其表达量在成株期叶片中最高,是根中的7.9倍,在茎、雄花、叶枕、叶鞘和花柄中的表达量相对较低;ZmPP6C能够响应不同光质处理,且受远红光和红光的影响较大。ZmPP6C的表达量在黑暗转入远红光30分钟达到峰值,然后迅速下降,直到24 h一直保持较低的水平;转入红光15分钟达到峰值,迅速下降后缓慢上升,直到24 h达到黑暗的7.2倍。3.ZmPP6C基因转录丰度能响应长日照和短日照处理,暗示其可能通过光信号转导通路来调控植物开花。在长日照条件下,玉米ZmPP6C的表达在长日条件下的光照和黑暗阶段各有一个明显的表达高峰,分别出现在进入光照阶段后10 h和进入黑暗阶段5 h时。在短日照条件下,ZmPP6C基因的表达丰度波动起伏较大,最高峰值发生在进入黑暗后10 h,次高峰值发生在进入光照后8 h时。4.ZmPP6C基因转录丰度受胁迫处理的调节。在高渗透、盐渍和淹水胁迫过程中,ZmPP6C基因的表达水平先降后升。B73幼苗在200 m M NaCl胁迫处理12 h、24 h和48 h时,ZmPP6C的转录丰度是未处理的0.8倍、1.1倍和2.6倍。B73幼苗在20%PEG6000处理20 h时,ZmPP6C基因的表达水平与未处理的相当;48 h时,ZmPP6C的表达水平上升到未处理的的4.5倍。淹水处理处理5 d和7 d,ZmPP6C的表达分别上升到未处理的1.3倍和4.1倍;然后恢复正常温室生长条件3 d和7 d,ZmPP6C的表达上升到未处理的3.0倍和6.9倍。表明ZmPP6C基因参与了玉米胁迫的应答。
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