【摘 要】
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本实验的目的是针对哮喘模型进行基因治疗,IL-4和IL-13是诱发哮喘的关键细胞因子,IL-4、IL-13的受体重叠性构成一个复杂的共刺激信号,可以诱导STAT6的磷酸化。IL-4-STAT6途径
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本实验的目的是针对哮喘模型进行基因治疗,IL-4和IL-13是诱发哮喘的关键细胞因子,IL-4、IL-13的受体重叠性构成一个复杂的共刺激信号,可以诱导STAT6的磷酸化。IL-4-STAT6途径在B细胞IgE型转换的过程中起到重要的作用,IL-13也可以激活STAT6途径并诱导IgE的生成。经证明鼠IL-4变异体C118(C末端118以后的氨基酸删除)蛋白有效的阻止了IL-4和IL-13诱导的信号传导和IgE水平,同时也阻止了过敏性气道嗜酸细胞浸润和AHR。目前鼠IL-4的双变异蛋白Q116D/Y119D(IL-4受体拮抗剂-IL-4RA)经证明可以阻止哮喘模型肺组织中STAT6的磷酸化,同时也阻止了过敏性气道嗜酸细胞浸润、气道高反应性和血浆IgE水平的升高。本实验就是采用能够拮抗IL-4和IL-13的IL-4变异体(Q116D/Y119D)-IL-4RA对哮喘模型进行基因治疗。首先用IL-4的突变引物对刺激后的BALB/C小鼠脾细胞悬液用RT-PCR的方法实现了IL-4突变基因扩增,随后将目的基因IL-4RA克隆入逆转录病毒真核表达载体并检测其在真核细胞BHK-21中的表达,然后利用携带目的基因的逆转录载体转染PA317细胞,包装出逆转录病毒,并对逆转录病毒进行浓缩和滴度测定。运用逆转录病毒能够整合到宿主基因组的特点,通过呼吸道给药转染小鼠哮喘模型,观察其对哮喘模型的治疗作用。本试验用逆转录病毒做为载体将目的基因IL-4RA转染小鼠哮喘模型,成功地拮抗了哮喘模型的过敏性炎症的产生和STAT6的表达,因为逆转录病毒载体可以整合到宿主的基因组并持续表达,故该试验有一定的临床意义,另外转染的目的基因与IL-4的分子结构差异很小,有很小的免疫源性,可以减轻宿主的免疫排斥反应。本试验为下一步对人类哮喘治疗的临床研究起到一个积极的促进作用。
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