【摘 要】
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目的:探究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,at RA)抑制骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成脂分化过程中Fra1(FOS like 1)的调控作用。方法:从2周龄SD(Sprague-Dawley)大鼠股骨和胫骨的骨髓中分离培养出原代BMSCs,并进行如下分组干预:过表达fra1组(ad-fra1)、
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目的:探究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,at RA)抑制骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成脂分化过程中Fra1(FOS like 1)的调控作用。方法:从2周龄SD(Sprague-Dawley)大鼠股骨和胫骨的骨髓中分离培养出原代BMSCs,并进行如下分组干预:过表达fra1组(ad-fra1)、at RA干预组(vector+at RA)、沉默fra1组(si-fra1)和沉默fra1后再加at RA干预组(si-fra1+at RA),均进行成脂诱导。采用油红O染色技术检测各组BMSCs脂滴积累水平。用实时荧光定量PCR(quantitative real-time reverse transcription PCR,q RT-PCR)检测成脂关键转录因子:过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(peroxisome proliferator-activated receptor gamma 2,PPARγ2)和CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)的表达,以及成熟脂肪细胞生物标志物:脂肪酸转运蛋白(CD36 molecule,Cd36)、脂肪酸结合蛋白(fatty acid binding protein,Fabp)、脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase,Lpl)和脂滴包被蛋白(Perilipin,Plin)的m RNA表达水平,Western blot检测相关蛋白的表达。染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,Ch IP)实验检测RARγ和fra1,FRA1和pparg2,FRA1和c/ebpa基因之间是否存在直接调控。结果:油红O染色实验的结果提示ad-fra1组和at RA组的脂滴积累明显低于vector组,而si-fra1组脂滴累积有明显上升。ad-fra1组和at RA组的Fra1和RARγ在m RNA和蛋白水平的表达上升,而成脂关键转录因子(PPARγ2,C/EBPα)以及成熟脂肪细胞生物标志物(Cd36,Fabp,Lpl,Plin)的m RNA以及蛋白的表达都有显著下调,且这些m RNA及其蛋白的表达在at RA组较ad-fra1组受到更强烈的抑制。si-fra1组的成脂基因其m RNA和蛋白表达有显著上调。Ch IP实验结果提示RARγ可直接结合在fra1基因的启动子区域,而FRA1可直接结合在pparg2和c/ebpa的启动子区域。结论:at RA可通过RARγ-Fra1-PPARγ2/C/EBPα轴抑制BMSCs的成脂分化。
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