豚鼠模型评价牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力的研究

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口蹄疫灭活疫苗现有的效力检验标准是测定疫苗对本动物的半数保护剂量(50% Protective Doses, PD50)来评价疫苗的免疫效力,此方法需要大量的非免疫本动物,存在着动物来源困难,试验成本高、劳动强度大等问题。在过去的几十年,豚鼠作为试验动物用于口蹄疫病毒研究,疫苗免疫豚鼠体内有中和抗体,并且能抵抗口蹄疫病毒的攻击而不发病,这可以作为口蹄疫灭活疫苗效力的判断标准。本研究以豚鼠为模型动物,探索一种替代本动物进行牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力检验的方法。豚鼠和牛同步测定6批牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗的半数保护剂量,其中2批疫苗进行重复试验。在每批疫苗的效力试验中,豚鼠和牛分别在免疫第28d和第21d用疫苗同源口蹄疫强毒进行攻击,临床观察10d,根据发病情况用Reed-muench法计算PD50值。统计学方法对豚鼠和牛测定的PD50值进行相关性分析。豚鼠在免疫第7d、14d、21d和28d采血,监测血清中抗Asia-1型口蹄疫病毒中和抗体水平。根据豚鼠在免疫第28d的抗体效价与攻毒试验中豚鼠受疫苗保护的情况,分析抗体水平与攻毒保护力的关系。6批牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗的批号为:N004、N005、N007、N010、N011、N012,疫苗对牛的PD50分别为:1.69、6.47、5.89、5.25、5.37和5.25,同批疫苗对豚鼠的PD50为:2.33、4.57、4.20、2.87、4.27和3.00。其中N007与N010批疫苗分别进行重复试验,牛的重复试验结果为:6.63和4.53,豚鼠的重复结果为:4.0和3.1。SPSS软件分析显示豚鼠PD50与牛PD50之间具有极显著的相关性(R=0.846,P<0.01),回归分析建立了应用豚鼠PD50预测牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力的线性回归模型y=1.625x-0.704( x表示豚鼠PD50结果;y表示牛PD50结果)。F-检验(F=15.058,P=0.008<0.01)和t-检验(t=3.880,P=0.008<0.01)证明该线性方程成立。豚鼠在免疫后第7d能检测到特异性中和抗体,抗体水平随免疫时间的延长动态变化,在免疫第28d抗体水平最高。豚鼠中和抗体与免疫计量具有相关性,抗体效价随免疫剂量的增加而升高。豚鼠免疫第28d抗体水平与攻毒保护力存在正相关的趋势。豚鼠是评价口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力较好的一种动物模型,并且豚鼠检测的PD50与牛测定的PD50具有较好的相关性。研究初步证明,豚鼠替代牛作为试验动物评价牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗的效力具有可行性。
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