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目的:使用低熔点琼脂糖包裹铜绿假单胞菌,通过气管切开方式接种建立大鼠肺部感染模型,并对模型进行初步评价。方法:1.实验动物:6～8周龄的雄性SD大鼠36只,体重190～210g,分为实验组和对照组,每组各18只,置于广西医科大学动物实验中心清洁级条件动物房内适应性饲养3天。2.PA低熔点琼脂糖包裹体制备:实验菌株PAO1复苏,扩菌,使用低熔点琼脂糖对菌液进行包裹形成悬液,对照组使用肉汤替代菌液,并调整悬液浓度,4℃保存备用。3.接种:分别对实验组和对照组大鼠麻醉、固定、备皮消毒,通过气管切开方式将上述悬液注入肺部,缝合伤口并清洁级饲养。4.生理状态观察:观察术后大鼠生理状态,有无呼吸道感染症状。5.样本收集:于术后第1、3、5天分别每组随机选取6只大鼠麻醉后腹主动脉采血处死,解剖大鼠取肺,部分肺组织冷藏至肺匀浆,剩余肺组织固定于甲醛固定液备用。6.肺组织细菌学检测:将冷藏的肺组织匀浆后涂盘,行菌落计数。7.肺大体病理观察:解剖过程中对肺大体病理进行观察并根据炎症的严重程度分Ⅰ～Ⅳ级,级别越高则炎症越严重。8.肺组织病理观察:将固定的肺组织制成石蜡切片,苏木精—伊红染色后,显微镜观察并根据炎症的严重程度分Ⅰ～Ⅳ级,级别越高则炎症越严重。结果:1.实验组大鼠接种后生理状态差,接种后第1天出现呼吸道症状,接种后第3、5天仍存在呼吸道症状;对照组大鼠除接种后第1天体重下降,无其他明显异常。2.实验组接种后第1、3、5天肺组织中均检出PA,且各个时间点的肺组织含菌量均（29）10~3CFU/ml,对照组则均未培养出PA。3.实验组肺大体多为Ⅳ级病变,对照组肺大体多为Ⅰ～Ⅱ级病变,实验组炎症严重程度高于对照组（P（27）0.05）。4.实验组肺组织多为Ⅳ级病变,对照组肺组织多为Ⅰ～Ⅱ级病变,实验组炎症严重程度高于对照组（P（27）0.05）。结论:通过气管切开方式注入PA低熔点琼脂糖包裹体,可成功建立大鼠PA肺部感染模型。该模型操作简单,重复性好,可用于PA肺部感染的各种研究。目的:通过建立三种不同c-di-GMP水平的铜绿假单胞菌大鼠肺部感染模型,观察大鼠肺组织细菌学、病理学特征及TNF-α、IL-17A的表达水平,探讨不同水平c-di-GMP铜绿假单胞菌在大鼠肺部感染的致病作用。方法:1.实验动物:6~8周龄的雄性SD大鼠72只,体重190~210g,分为胞内c-di-GMP低水平的PAO1/Plac–yhj H菌株组（Y组）、正常水平的PAO1菌株组（P组）、高水平的PAO1Δwsp F菌株组（W组）,每组各24只。2.PA低熔点琼脂糖包裹体制备:三种菌株复苏,扩菌,使用低熔点琼脂糖对菌液进行包裹形成悬液,并调整悬液浓度,4℃保存备用。3.接种:分别对三组大鼠麻醉、固定、备皮消毒,通过气管切开方式将上述悬液注入肺部,缝合伤口并清洁级饲养。4.样本收集:于术后第1、3、5天分别每组随机选取8只大鼠麻醉后腹主动脉采血离心得血清,冷藏备用,解剖大鼠取肺,部分肺组织冷藏至肺匀浆,剩余肺组织固定于甲醛固定液备用。5.肺组织细菌学检测:将冷藏的肺组织匀浆后涂盘,行菌落计数。6.肺大体病理观察:解剖过程中对肺大体病理进行观察并根据炎症的严重程度分ⅠⅣ级,级别越高则炎症越严重。7.肺组织病理观察:将固定的肺组织制成石蜡切片,苏木精—伊红染色后,显微镜观察并根据炎症的严重程度分ⅠⅣ级,级别越高则炎症越严重。8.炎症因子检测:酶联免疫吸附实验检测三组大鼠血清和肺组织匀浆中的TNF-α、IL-17A含量。9.免疫组化检测:免疫组化染色实验检测三组大鼠肺组织IL-17A含量,以平均光密度表示。结果:1.三组大鼠接种相应PA琼脂糖包裹体后的第1、3、5天均培养出PA,三组肺组织含菌量:W组（29）P组（29）Y组（P（27）0.05）;各组组内接种后第5天的肺组织含菌量均低于接种后第1天的肺组织含菌量（P（27）0.05）。2.W组肺大体病理多为Ⅳ级病变,P组肺大体病理多为ⅢⅣ级病变,Y组肺大体病理多为ⅠⅡ级病变,三组肺大体病理炎症严重程度:W组（29）P组（29）Y组（P（27）0.05）。3.W组肺组织病理多为Ⅳ级病变,P组肺组织病理多为ⅢⅣ级病变,Y组肺组织病理多为ⅠⅡ级病变,三组肺组织病理炎症严重程度:W组（29）P组（29）Y组（P（27）0.05）。4.在接种菌株后的第1、3、5天,三组大鼠血清中TNF-α、IL-17A的含量:W组（29）P组（29）Y组（P（27）0.05）;在接种菌株后的第1和第3天,三组大鼠肺匀浆中TNF-α、IL-17A的含量:W组（29）P组（29）Y组（P（27）0.05）;在接种菌株后的第5天,W组大鼠肺匀浆中TNF-α、IL-17A含量均高于P组与Y组（P（27）0.05）;三组大鼠血清和肺匀浆中的TNF-α、IL-17A含量均随时间延长而增高。各组大鼠TNF-α、IL-17A的含量与肺大体病理评级、肺组织病理评级有明显相关性。5.在接种菌株后的第1、3、5天,三组大鼠肺组织IL-17A平均光密度从高到低排序为:W组＞P组＞Y组（P（27）0.05）,各组组内接种后第5天的肺组织IL-17A平均光密度均高于接种后第1天的肺组织IL-17A平均光密度（P（27）0.05）结论:接种不同c-di-GMP水平的铜绿假单胞菌,大鼠肺组织细菌学、肺损伤程度以及肺炎症反应、TNF-α、IL-17A的表达,从高到低的顺序为:胞内高水平c-di-GMP的PAO1Δwsp F组＞胞内正常水平c-di-GMP的PAO1组＞胞内低水平c-di-GMP的PAO1/Plac–yhj H组。由此提示胞内c-di-GMP信号分子参与了铜绿假单胞菌肺部感染的致病过程,c-di-GMP水平与细菌的毒力强弱相关,推测c-di-GMP信号分子在铜绿假单胞菌肺部感染过程中,调控不同的致病因子的产生和表达。