超嗜热菌Pyrococcus furiosus的培养及其α-淀粉酶基因的克隆与表达

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α-淀粉酶是最重要的一类工业酶,它们在淀粉加工、酿酒、乙醇生产、纺织和其他工业部门上都有广泛的应用.因为淀粉只在100℃或以上才能完全溶于水溶液,大多数应用于工业上的α-淀粉酶都要求能够在极高的温度(可达100℃)下使用.根据GenBank公布的P.furiosus 的α-淀粉酶基因amyA序列设计两条引物,以P.furiosus的基因组DNA为模板进行PCR.将PCR产物插入表达载体pSE380和pJL,得到重组质粒pSE- amyA和pJL-amyA,转化到大肠杆菌DH5α,Top10,BL21(DE3)中.将重组菌株分别在29℃和37℃诱导表达,测得最高活力为1.5U/ml(在29℃诱导下).SDS-PAGE亦显示PFA表达出了活力.
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