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奶牛乳房炎是奶牛最常发生和治疗花费最高的疾病,是奶牛乳腺组织受到病原微生物的入侵而引起的一种炎症反应。国内外学者研究表明,引起奶牛乳房炎的主要病原菌有金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌和支原体等。在我国,无乳链球菌是奶牛乳房炎致病性链球菌的主要种类。为查明我国奶牛乳房炎无乳链球菌的血清型分布、溶血特性、耐药性及携带耐药基因、毒力基因的情况。本研究对2012-2015年间本课题组分离的209株链球菌疑似菌株进行鉴定,并对其中无乳链球菌进行了相关研究。采用CAMP实验、触酶实验、16S rDNA扩增技术和生化实验对209株链球菌疑似菌株进行鉴定。结果鉴定出无乳链球菌81株、粪肠球菌45株、屎肠球菌32株、乳酸乳球菌15株、乳链球菌13株、副乳房链球菌6株、格氏乳球菌6株、停乳链球菌4株。其中,无乳链球菌占链球菌总数的40.1%。结果表明,无乳链球菌是奶牛乳房炎链球菌的主要菌种。采用多重PCR的方法对81株无乳链球菌进行血清型分型。观察不同血清型菌株在绵羊血平板上的溶血情况,分析血清型和溶血特性之间的相关性。结果发现,81株无乳链球菌血清型分布为Ia型(56.62%)、II(48.15%)和VII(1.23%),溶血情况为43株(53%)β溶血和38株(47%)非β溶血菌。血清型(Ia型和II型)与溶血特性(β溶血和非β溶血)之间存在显著的相关性。采用药敏纸片和MIC方法对81株无乳链球菌的耐药情况进行检测,采用普通PCR方法检测菌株耐药基因,分析不同抗生素耐药之间的相关性,分析耐药表型与耐药基因的相关性。结果发现,无乳链球菌多重耐药严重,约14.8%的菌株对至少6类检测的抗生素耐药;超过半数的菌株携带ermA(53.1%)和erm B(85.2%),而ermC(3.7%),携带tetK、tetM和tetO分别为39.5%、29.6%和29.6%,未检测出mefA、tetL基因;部分不同类抗生素耐药之间存在相关性,红霉素耐药与ermA基因显著相关(P<0.05),四环素耐药与tetK、tetM和tetO极显著相关(P<0.01)。采用普通PCR方法检测81株无乳链球菌的毒力基因。结果发现毒力基因cyl、cfb、hylB的携带率均在98%以上,scpB、glnA、和scaA的携带率均超过50%,而bac、bca和lmb基因的携带率分别为12.3%、49.3%和24.7%。结果表明毒力基因cyl、cfb、hylB为奶牛乳房炎无乳链球菌的优势毒力基因。本项研究对今后临床合理使用抗生素,提高疗效,进一步深入开展牛源无乳链球菌抗生素耐药机制,筛选候选蛋白,研制有效的无乳链球菌疫苗等具有重要的指导意义。