基于攻下逐瘀法运用大成汤对大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3表达的影响

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目的:观察大成汤治疗大鼠急性脊髓损伤的作用,通过对大鼠急性脊髓损伤造模后对其行为学进行评价,采用改良Rivlin斜板试验,BBB(Basso,Beattie,Bresnahan)评分对实验大鼠脊髓功能进行行为学评分,评价脊髓损伤程度。以及采用H.E染色及免疫组化技术方法检测Caspase-3因子的表达,从而判断脊髓损伤程度、脊髓损伤区的病理变化及细胞再生质量。  方法:取健康SD大鼠120只,雌雄不拘,同一批次,体重200+20g。平均分为4个实验组,每组30只:假手术组(n=30),安慰剂组(n=30),对照组(n=30),治疗组(n=30)。脊髓损伤动物模型建立采用改良Allen s撞击法(1)。安慰剂组、对照组和治疗组均使用10%水合氯醛按0.3ml/100g体重腹腔注射麻醉,常规备皮消毒铺巾后,行T9-10椎板切除术,暴露硬脊膜,用重10g金属棒从2.5cm高处沿中空钢管垂直自由落下撞击T9-10脊髓,造成不完全性ASCI;假手术组只做T9-10椎板切除术,显露硬脊膜,不用重物撞击。术后治疗组给予大成汤浓缩液2ml/100g.d灌胃;假手术组和安慰剂组给予等量生理盐水灌胃;对照组每天给予等量0.3%强的松片水溶液灌胃。术后1、3、7、14天时,在4组中分别随机各取5只大鼠给予BBB评分及斜板试验,然后在麻醉下剖胸,经左心室一主动脉插管,灌注生理盐水约200m1,剪开右心耳,直至流出液澄清。用4%多聚甲醛约200m1灌注固定30分钟,解剖椎管取出损伤段脊髓及损伤上下段各约0.5cm,再置于4%多聚甲醛内过夜进行固定,然后常规进行脱水、石蜡包埋。做冠状面连续切片,切片厚约5μm.运用HE染色观察形态学变化;免疫组化法检测Caspase-3的表达,采用计算机图像分析技术进行分析。  结果:假手术组脊髓神经功能正常,安慰剂组、对照组和治疗组均有明显神经功能障碍,而对照组和治疗组经药物治疗后神经功能较损伤组均有明显改善,相对而言,治疗组对神经功能的改善更为明显,各指标检测结果在统计学上差异有显著性(P<0.05)。(1)行为学改变:假手术组的斜板试验和BBB评分在各个时间点均无明显变化,对照组和治疗组相较于安慰剂组在随着时间的推移评分均明显升高,各指标检测结果在统计学上差异有显著性;(2)组织学病理变化:假手术组无损伤性改变,安慰剂组、对照组和治疗组均有不同程度变化,安慰剂组病理变化较治疗组和对照组明显;(3)免疫组织化学:观察到各组中均有Caspase-3蛋白阳性表达;假手术组未见到Caspase-3阳性细胞,安慰剂组、对照组和治疗组Caspase-3蛋白均明显增加,其中安慰剂组细胞Caspase-3表达的神经细胞明显多于治疗组和对照组,各指标检测结果在统计学上差异有显著性(P<0.05)。  结论:(1)大成汤和强的松均可抑制ASCI后神经细胞的凋亡,减轻脊髓继发性损伤;(2)大成汤可以促进大鼠运动功能的恢复,增强轴突再生功能,促进脊髓神经功能的恢复,作用优于强的松。
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