RNAi抑制Hl-60细胞FLT3基因表达及诱导凋亡的研究FLT3基因的突变、过度表达与急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)的发生密切相关。AML中最常见的突变有FLT3内串联复制(internaltandemduplication,FLT3-TTD)和FLT3激酶区活化环内的点突变(Kinasedomainmutation:KDM)两种形式。 RNAi是双链RNA介导的遗传干涉现象，它能够特异、有效地降解mRNA，从而引起转录后水平的基因沉默。这为肿瘤的预防和治疗提供了新的方法和思路。 目的：针对FLT3基因构建shRNA-FLT3的表达载体pGenesil-1-shRNA-FLT3，转染HL-60细胞，研究RNAi对HL-60细胞FLT3基因表达及诱导凋亡作用的影响，为AML的预防和治疗提供新的思路。 方法：根据RNAi原理，构建siRNA的表达载体pGenesil-1-shRNA-FLT3，先后用脂质体法和电穿孔法转染HL-60细胞，用RT-PCR检测FLT3的mRNA表达，Westernblot检测FLT3蛋白水平，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，MTT检测细胞生长活力。 结果：成功构建了shRNA-FLT3表达载体pGenesil-1-shRNA-FLT3。转染HL-60细胞48d,时后，RT-PCR、Westernblot检测显示FLT3的mRNA表达明显受到抑制(p＜0.05)，FLT3蛋白质的表达下降(p＜0.05)，流式细胞仪检测显示可诱导细胞凋亡(p＜0.05)，MTT检测显示细胞生长活力降低(p＜0.05)。 结论：FLT3在AML的发生与发展中确实起着重要的作用。所设计的FLT3-siRNA均能抑制FLT3基因表达并能诱导HL-60细胞凋亡。4条FLT3-siRNA均有效，可用于后期的动物体内实验。HL-60细胞不能被脂质体转染试剂Lipofectamine2000、Metafectene、Sofast等转染，电穿孔法可转染成功。