嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）是典型的食源性病原菌,其致病性的发挥多依靠如溶血素、胞外蛋白酶、运动性和生物膜形成等。而毒力和生物膜产生通常需要依靠信号转导网络介导。前期研究发现嗜水气单胞菌中存在Ahy I/R型和Lux S型信号通路,而LitR是双通路下游的群体感应调控因子,可能与嗜水气单胞菌中多种毒力因子和生物膜形成密切相关。目前LitR对毒力和生物膜的调控机理尚不清晰。本文从LitR对毒力和生物膜形成的调控作用、LitR调控生物膜形成的网络途径等方面进行研究,旨在更为深入地揭示LitR对毒力和生物膜的调控机理。本文首先将回补质粒电击转化入嗜水气单胞菌lit R缺失突变株,利用嗜水气单胞菌野生株、lit R缺失突变株及回补株评价了LitR对生长能力、毒力和生物膜形成的影响,发现lit R缺失导致了嗜水气单胞菌生长速率有所降低;LitR能够正向调控细菌的溶血性、胞外蛋白酶活性,负向调控细菌的运动能力和生物膜形成能力。进而通过微量热泳动技术（Micro Scale Thermophoresis,MST）测定了LitR与溶血素基因hem启动子区和丝氨酸蛋白酶基因sp启动子区的结合能力。其中,LitR与hem启动子区hem3结合位点存在一强一弱的双相结合信号,与hem4有较强的结合能力,Kd值达到了4.58±1.36μM。随后,为进一步解析LitR对生物膜的调控机理,我们首先基于与霍乱弧菌生物膜形成转录因子Vps T的同源性比对分析,确定了嗜水气单胞菌中Vps T的同源蛋白Csg AB。为了探究LitR是否通过Csg AB调控生物膜形成,采用荧光定量PCR、EMSA和DNase I足迹确定LitR对csg AB的调控作用,结果表明,LitR负向调控csg AB的转录表达,并且能够直接结合csg AB的启动子区。进而通过接合转移构建csg AB无痕突变株。利用嗜水气单胞菌野生株、csg AB缺失突变株探究了Csg AB对生长能力和生物膜形成的影响,结果表明csg AB缺失对细菌生长能力没有影响,Csg AB能够正向调控运动性及生物膜形成。上述结果证明Csg AB能够介导LitR调控生物膜形成。最后,由于第二信使环二鸟苷酸（Cyclic di-GMP,c-di-GMP）信号途径在细菌生物膜形成中具有重要的调控作用,我们对嗜水气单胞菌c-di-GMP代谢相关蛋白及效应蛋白进行筛选,并研究了LitR对部分代谢相关蛋白的调控作用。首先,利用NCBI和Uni Prot数据库收集了嗜水气单胞菌中70个c-di-GMP代谢相关蛋白,通过与文献中c-di-GMP代谢活性必须的氨基酸残基进行比对,预测到嗜水气单胞菌中单GGDEF结构域蛋白中75%具有二鸟苷酸环化酶活性（Diguanylate cyclase,DGC）;单EAL结构域蛋白中80%具有磷酸二酯酶活性（Phosphodiesterase,PDE）;GGDEF和EAL双结构域蛋白中30.8%具有双酶活性、38.4%具有PDE活性、7.6%具有DGC活性、23.1%无活性;HD-GYP结构域蛋白中33.3%具有PDE活性。进而通过查找文献报道c-di-GMP效应蛋白结构域并进行蛋白序列比对,预测了6个可能的效应蛋白,其中包括了生物膜调控因子Csg AB,并通过亲和拉下实验钓取了53个潜在的c-di-GMP效应蛋白。而后利用荧光定量PCR技术检测LitR对18个代谢相关蛋白的调控,结果表明,LitR对大部分c-di-GMP代谢相关基因调控不明显,仅对两个GGDEF和EAL双结构域蛋白编码基因AHA3469和AHA1559、一个EAL结构域蛋白编码基因AHA0909和一个HD-GYP结构域蛋白编码基因AHA2853有较强的负向调控作用。推测群体感应调控因子LitR可能通过调控c-di-GMP信号通路相关蛋白来调控生物膜的形成。