论文部分内容阅读
肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC,以下简称肝癌)是临床上最常见的恶性肿瘤之一,占所有癌症的5.6%,而中国是肝癌发病率与死亡率最高的国家，肝癌的发病人数占全球的55%。尽管近年来肝癌的基础和临床研究都取得了不少进展，但目前仍缺乏有效的肝癌早期预防和筛查手段。肝癌治疗方法以早期手术切除为主，同时辅以介入治疗、消融治疗及药物治疗等，但都具有疗效不确定、治疗后易复发等缺点，这与肝癌发生发展的分子生物学机制未明有关。肝癌病死率高,复发侵袭转移是影响预后的最重要因素,所以研究肝癌的侵袭转移机制对治疗肝癌有极其重要的意义,也是近来研究的热点。肝癌在侵袭转移过程中必须破坏细胞外基质和基底膜,这个过程依靠蛋白降解酶类,其中最主要的有基质金属蛋白酶(MMPs)和尿激酶纤溶酶激活物系统(PA)。MMPs是一类具有Zn2+的肽链内切酶，几乎能降解所有的细胞外基质。MMPs家族中已发现有26个成员，最主要的是MMP-2(胶原酶A)和MMP-9(胶原酶B)，可以降解IV、V型胶原、层粘连蛋白等成分,破坏基底膜的完整性。MMPs以酶原的形式分泌，需要激活产生活性；其活性被相应的组织型基质金属蛋白酶抑制物(tissue inhibitors of metalloproteinases, TIMPs)所抑制。目前发现的TIMPs包括TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、TIMP-4四种，可通过非共价键结合相应活性的MMP来抑制其活性。Gao等[1]发现下调MMP-2和MMP-9，可抑制Huh7细胞的侵袭和转移。Chen等[2]通过对92例肝癌患者回顾性分析发现，MMP-9在HCC患者手术切除后肿瘤复发和生存的预测优于MMP-2。Cao等[3]在体外实验中，应用Western bloting法检测人肝癌Huh7细胞PPARγ和PTEN蛋白表达情况，证实PPARγ活化能够上调抑制基因PTEN高表达。PPARγ活化能上调PTEN高表达后，进而抑制PI3K/AKT通路，而PI3K/PTEN/Akt通路参与肝癌细胞的侵袭和转移过程且与基质金属蛋白酶(MMPS)表达相关[4]。进一步研究发现，特异性拮抗PPARγ信号能够抑制侵袭转移密切相关蛋白MMP-9的活化。Zhou等[5]报道异丙酚通过PI3K/Akt信号降低肝癌基质金属蛋白酶的水平，来抑制肝癌细胞的迁移和侵袭。但MMP-9是否参与PPARγ抑制肝癌侵袭转移过程？是否存在PPARγ/PTEN/MMP-9通路，尚需进一步研究。目的探讨肝细胞癌中是否存在PPARγ/PTEN/MMP-9信号通路，及PTEN和基质金属蛋白-9(MMP-9)的变化，进一步阐明该信号通路对肝细胞肝癌侵袭和转移的作用。方法培养SMMC-7721肝癌细胞，经PPARγ天然配体15-脱氧-前列腺素J2(15-d-PGJ2)和抑制剂GW9662处理，用MTT法测肝癌细胞活力，用伤口愈合实验和Transwell方法检测细胞的迁移能力，用RT-PCR检测细胞PTEN和MMP-9mRNA的表达，用Western blot检测细胞PTEN和MMP-9蛋白的表达。结果15-d-PGJ2对肝癌细胞的增殖具有抑制作用，且呈剂量依赖性。15-d-PGJ2通过上调PTEN mRNA和蛋白的表达，减少MMP-9mRNA和蛋白的表达，来抑制SMMC-7721肝癌细胞侵袭和转移；而GW9662无此作用，但可完全扭转这一作用。结论肝细胞肝癌可能存在PPARγ/PTEN/MMP-9信号通路，通过上调PTEN和下调MMP-9的表达，来抑制肝癌细胞的侵袭和转移。