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目的:1.论证视网膜色素变性“虚中夹瘀”病机的动物实验支撑。2.探讨枸杞、丹参对视网膜色素变性模型鼠RCS(rdy-/-,p-/-)“虚中夹瘀”证的干预效果。3.观察枸杞、丹参对RCS大鼠视网膜RHO、XBP1、Caspase12表达的影响,以及探讨RHO、XBP1、Caspase12表达的相互关系。从通过减轻视网膜感光细胞内质网应激反应以及减少内质网凋亡通路从而改善视网膜感光细胞分泌RHO蛋白方面,为枸杞丹参治疗“虚中夹瘀”证型视网膜色素变性提供实验依据。方法:第一部分:实验对象分2组。空白组:RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠雌雄各5只,共10只(n=10);模型组:RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠雌雄各5只,共10只(n=10)。ELISA法检测并比较“虚”证指标:c AMP、c GMP、c AMP/c GMP、PG、E2;ELISA法检测并比较“瘀”证指标:P-Selectin;检测血液流变学各项指标;组织切片HE染色观察各组RCS大鼠视网膜结构。第二部分:实验对象分5组,分别为:空白组、模型组、枸杞组、丹参组、枸杞加丹参组(杞参组)。空白组:RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠雌雄各4只,共8只(n=8),灌胃生理盐水;模型组:RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠雌雄各4只,共8只(n=8),灌胃生理盐水;枸杞组:RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠雌雄各4只,共8只(n=8),灌胃枸杞;丹参组:RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠雌雄各4只,共8只(n=8),灌胃丹参;杞参组:RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠雌雄各4只,共8只(n=8),灌胃枸杞加丹参。灌胃28天后,ELISA法测定其虚证指标:c AMP、c GMP、c AMP/c GMP、PG、E2及检测瘀证指标:P-Selectin,检测血液流变学各项指标,组织切片HE染色观察各组RCS大鼠视网膜结构。第三部分:实验对象按方法第二部分所述分5组,灌胃28天后,免疫组化法检测各组视网膜组织中RHO、XBP1、Caspase12表达,RT-q PCR法及Western Blot法分别测定各组视网膜组织中RHO、XBP1、Caspase12 m RNA及蛋白相对表达水平。并对WB检测的RHO、XBP1、Caspase12蛋白相对表达水平行相关性分析。结果:第一部分:1.雌性RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠组血浆中E2含量值明显低于RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。2.雄性RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠组血浆中PG含量值明显低于RCS(rdy+/+,p+/+)雄性大鼠组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。3.RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠组视网膜组织匀浆c AMP、c GMP、c AMP/c GMP高于RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠组,两组差异有显著统计学意义(P<0.01)。4.RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠组血粘度值(当血流切变力分别为为5.00/s、100.00/s、200.00/s时),血浆粘度值、全血高切相对指数、全血低切相对指数、纤维蛋白原,明显高于RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠组,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。5.RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠组血浆中P-Selectin含量明显高于空白组RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠,两组间差异有显著统计学意义(P<0.01)。6.RCS大鼠视网组织HE染色可见:RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠视网膜厚度明显较RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠视网膜各层结构紊乱萎缩变薄。病变主要位于视网膜外层,视锥、视杆细胞萎缩变性。第二部分:1.灌胃28天后,雌性RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠杞参组血浆中E2含量明显高于雌性RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠模型组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。2.灌胃28天后,雄性RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠杞参组血浆中PG含量明显高于雄性RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠模型组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。3.RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组视网膜匀浆组织c AMP、c GMP、c AMP/c GMP含量值明显低于RCS(rdy-/-,p-/-)模型组,差异均有统计学意义(P<0.05);且RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组接近RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠空白对照组。4.RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组血浆粘度值、全血高切相对指数、纤维蛋白原明显低于RCS(rdy-/-,p-/-)模型组,差异有显著统计学意义(P<0.05);且RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组接近RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠空白对照组。5.RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组P-Selectin值明显低于RCS(rdy-/-,p-/-)模型组,差异有显著统计学意义(P<0.01);RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组与RCS(rdy+/+,p+/+)空白对照组子集更接近,位于同一子集内.6.RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组大鼠视网膜厚度明显较RCS(rdy-/-,p-/-)模型组大鼠视网膜增厚,视网膜色素上皮条带部分可见,部分外核层光感受器感觉纤毛层部分可见,光感受器细胞核数目较RCS(rdy-/-,p-/-)模型组多,外从状层、外核层、视杆视锥层较RCS(rdy-/-,p-/-)模型组结构清晰且增厚。第三部分:1.免疫组化检测显示:RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组大鼠视网膜上RHO蛋白阳性表达较RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠模型组明显增多,但较RCS(rdy+/+,p+/+)空白组少;RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组大鼠视网膜上XBP1、Caspase12蛋白阳性表达较RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠模型组明显减少,但较RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠空白组多。2.RT-q PCR检测显示:RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组RHO m RNA相对表达量明显高于RCS(rdy-/-,p-/-)模型组,差异有统计学意义(P<0.05),且接近RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠空白对照组。RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组XBP1、Caspase12 m RNA相对表达量明显低于RCS(rdy-/-,p-/-)模型组,差异有显著统计学意义(P<0.01),且接近RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠空白对照组。3.WB检测显示:RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组RHO蛋白相对表达量明显高于RCS(rdy-/-,p-/-)模型组,差异有统计学意义(P<0.05),且接近RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠空白对照组。RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组XBP1、Caspase12蛋白相对表达量明显低于RCS(rdy-/-,p-/-)模型组,差异有统计学意义(P<0.05),且接近RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠空白对照组。4.RHO、XBP1蛋白相对表达量呈负相关且相关性显著,Pearson相关系数r=-0.597,P=0.000<0.01;RHO、Caspase12蛋白相对表达量呈负相关且相关性显著,Pearson相关系数r=-0.588,P=0.000<0.01;XBP1、Caspase12蛋白相对表达量呈正相关且相关性显著,Pearson相关系数r=0.512,P=0.001<0.01。结论:1.视网膜色素变性经典模型鼠RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠具有“虚中夹瘀”症候。2.“补虚活血”代表中药枸杞加丹参可以改善“虚中夹瘀”RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠“虚”证和“瘀”证指标。3.枸杞加丹参可以上调“虚中夹瘀”证RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠视网膜中反映感光细胞功能的RHO表达,减弱反映内质网应激水平的XBP1和反映内质网凋亡途径的Caspase12的表达。4.RCS大鼠视网膜组织RHO与XBP1蛋白相对表达量呈负相关且相关性显著,RHO、Caspase12蛋白相对表达量呈负相关且相关性显著,XBP1与Caspase12蛋白相对表达量呈正相关且相关性显著。5.推测枸杞丹参治疗“虚中夹瘀”证RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠机制为:枸杞丹参改善RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠的“虚”证与“瘀”证,从而减少视网膜损伤因素,减轻视网膜细胞的ERS,下调视网膜细胞内质网应激因子XBP1及内质网凋亡途径诱导因子Caspase12,减少视网膜感光细胞变性凋亡,促进RHO表达。