【摘 要】
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目的:通过对缺氧时H9C2心肌细胞自噬相关蛋白变化的观察,证明自噬在缺氧时的变化和作用,以及HIF-1α可能与自噬有关。方法:1分组:1.1正常对照组:选用正常高糖(10%)DMEM培养基
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目的:通过对缺氧时H9C2心肌细胞自噬相关蛋白变化的观察,证明自噬在缺氧时的变化和作用,以及HIF-1α可能与自噬有关。方法:1分组:1.1正常对照组:选用正常高糖(10%)DMEM培养基,三十七摄氏度、5%二氧化碳孵箱培养。不做处置。1.2缺氧组:选用不含糖无血清培养基做缺氧处理,无任何药物添加。1.3 3-MA自噬抑制剂组:选用正常高糖(10%)DMEM培养基,加入3-MA自噬抑制剂,三十七摄氏度、5%二氧化碳孵箱培养。1.4缺氧+3-MA自噬抑制剂组:使用培养基为无糖无血清,抑制剂为3-MA自噬进行缺氧处理。2方法:通过Western Blot蛋白印记方法检测细胞蛋白量表达。通过MTT细胞增殖试剂盒检测细胞增殖抑制率。结果:通过对比空白对照、缺氧、自噬抑制和缺氧加自噬抑制四组蛋白中Lc3、m TOR、Bcl-2/Bax、HIF-1α蛋白量的比较,结果6h缺氧的情况下,自噬明显变化。Lc3在缺氧后下降,6h变化最为明显。m TOR对照组(1.0±0.04)vs缺氧组(2.30±0.20),P<0.05,显示m TOR在缺氧6h升高,与Lc3的结果一致。Bcl-2/Bax对照组(0.81±0.02)vs缺氧组(0.46±0.02),对照组(0.81±0.02)vs3-MA组(0.41±0.02),对照组(0.81±0.02)vs缺氧+3-MA组(0.29±0.20),缺氧组(0.46±0.02)vs缺氧+3-MA组(0.29±0.20),组间比较P<0.05。MTT显示缺氧后抑制率增加。显示凋亡在缺氧,自噬抑制后凋亡进一步增加。HIF-1α对照组(1.04±0.06)vs缺氧组(1.52±0.02),对照组(1.04±0.06)vs缺氧+3-MA组(1.40±0.20),组间比较P<0.05,显示在缺氧后HIF-1α表达上升,缺氧组(1.52±0.02)vs缺氧+3-MA组(1.40±0.20),组间比较没有统计学意义,可以推断HIF-1α位于3-MA作用位点上游。进一步在HIF-1α和自噬下降之间存在联系。结果SPSS17.0软件分析,组件两两比较P<0.05,组间比较有统计学意义。认为实验结果可证明HIF-1α参与了心肌细胞缺氧情况下自噬的变化。结论:1 LC3II/I于缺氧6h最为明显,同时m TOR表达上升,证明缺氧时自噬下降。2 Bcl-2/Bax于缺氧后6h比值下降,证明心肌cell自噬减少,凋亡增加。自噬对细胞起保护作用。3 HIF-1α缺氧时增高,自噬抑制后无变化,考虑HIF-1α的变化与自噬的降低相关,且位于上游。
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