目的探讨靶向的RNA干扰沉默信号转导及转录活化子3（signal transducer andactivator of transcription3，STAT3）对类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes，FLS）增殖与凋亡的影响，从而为进一步明确RA的的发病机制提供实验基础，为RA的靶向治疗提供理论依据。方法1、滑膜细胞的来源以及分组将类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（购自于广州吉妮欧生物有限公司）分为5组：空白组（即正常培养的FLS组）、阴性对照组（即加入空白质粒的FLS组）、RNAi-1组、RNAi-2组和RNAi-3组，后3个组均为加入不同靶向STAT3的小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）的重组质粒，分别针对3个不同的靶点。2、最佳靶点的筛选质粒经脂质体2000的介导转染进入滑膜细胞，分别于转染后的24h、48h、72h在荧光倒置显微镜下观察转染效率。再用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹（Western blot）法分别检测各组FLS中STAT3mRNA及其蛋白质的表达情况，从三个RNAi组中筛选出最佳靶点组作为RNAi组，从而将后续实验分为三组，即空白组、阴性对照组和RNAi组。3、滑膜细胞增殖活力的检测用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况，以490nm处的光吸收度（A）值代表活细胞数量，分别记录24h、48h、72h、96h、120h各组细胞的A值，绘制增殖曲线，以观察细胞的增殖活力。4、滑膜细胞凋亡的检测转染后48h，各组细胞经AV/PI双染色后，通过流式细胞术（FCM）来检测各组滑膜细胞的凋亡情况。5、凋亡相关因子的表达通过Western blot检测Bcl-xl、Bax和caspase-3蛋白的表达水平，以进一步明确RNA干扰沉默STAT3后对滑膜细胞增殖与凋亡影响的机制。结果1、最佳靶点的筛选在转染RA-FLS后，空白组、阴性对照组、RNAi-1组、RNAi-2组和RNAi-3组STAT3mRNA表达抑制率分别为（27.32±2.06）%、（30.61±2.47）%、（76.99±2.05）%、（72.75±1.74）%和（66.50±2.47）%，STAT3蛋白表达抑制率分别为（44.35±2.04）%、（43.10±2.59）%、（83.57±1.56）%、（77.05±0.54）%和（69.44±2.76）%，5组STAT3mRNA及其蛋白表达抑制率之间差异均有统计学意义（F值分别为362.92和248.08；P <0.01）；其中RNAi-1组、RNAi-2组和RNAi-3组STAT3mRNA及其蛋白表达抑制率均高于空白组以及阴性对照组（P<0.01），并且由结果可以看出RNAi-1组无论是对STAT3mRNA还是蛋白质的表达其抑制率都是最高的，为最佳靶点组，并以此组作为RNAi组进行后续实验。2、MTT法检测滑膜细胞增殖情况的结果空白组、阴性对照组以及RNAi组（即RNAi-1组） A值分别为（0.5533±0.3432）、（0.5350±0.3373）和（0.1583±0.0794），3组间差异有统计学意义（F=3.761，P=0.047）；其中空白组A值与阴性对照组比较，差异无统计学意义（P=0.912）；RNAi组A值与空白组、阴性对照组比较差异有统计学意义（P值分别为0.028和0.035）。3、流式细胞术的检测结果空白组与阴性对照组无显著差异（P>0.05），RNAi组的凋亡率与空白对照组、阴性对照组凋亡率有显著行差异（P<0.05）。空白组、阴性对照组、RNAi组的凋亡率分别为(2.62±0.05)%、(2.95±0.03)%、(15.89±0.39)%。4、Western blot检测凋亡相关因子的表达Bcl-xl、Bax、caspase-3的蛋白表达率在空白组、阴性对照组以及RNAi组分别为：（49.97±0.56）%、（47.64±0.89）%、（22.41±1.11）%，（50.28±1.74）%、（48.91±2.18）%、（21.88±0.88）%和（21.16±0.69）%、（74.03±1.15）%、（37.78±0.92）%。三个凋亡相关因子的表达率在空白组与阴性对照组之间比较，均无明显差异（P值分别为：0.748、0.343、0.531，P值均>0.05），而RNAi组与空白组以及阴性对照组之间比较差异均有明显的统计学意义（P<0.01）。结论1、靶向的STAT3重组质粒转染滑膜细胞后能够有效的抑制RA-FLS中STAT3mRNA及其蛋白的表达。2、RNA干扰沉默STAT3能够明显抑制FLS的增殖，促进其凋亡，其机制可能是通过上调促进凋亡的基因Bax表达，同时抑制抗凋亡基因Bcl-xl的表达来实现的。