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本文对怀山药叶片、茎段进行了离体培养,对其脱分化过程中的形态发生进行了组织细胞学观察,还研究了继代培养中染色体稳定性和脱分化过程中的生理变化,结果如下:
1.怀山药外植体诱导愈伤组织的能力受到外植体种类、激素组合、接种方式等多方面因素的影响:(1)47号山药叶片、茎段以光培养下6-BA2mg·L-1(单位下同)+NAA2的组合效果较好,其中叶片以上表面朝下的出愈率较高,茎段横放比竖置效果好;(2)铁棍山药叶片、茎段在光、暗条件下形成愈伤组织均以6-BA2+NAA2组合为佳,培养温度在24~30℃时效果较好,叶片年龄小则出愈率较高。
2.在器官分化过程中,47号山药茎段以6-BA2+NAA0.02效果较好;铁棍山药茎段以KT4+NAA0.02为佳;而叶片愈伤组织则没有再分化。
3.对怀山药叶片、茎段离体培养中形态发生的组织细胞学观察结果表明:(1)叶外植体形成的愈伤组织起源于叶肉细胞,茎段外植体形成的愈伤组织起源于茎的皮层外层细胞;(2)细胞脱分化的特点是细胞质变浓,核相对变大,核仁明显;(3)外植体细胞脱分化后,其分裂方式为无丝分裂。
4.怀山药愈伤组织继代培养中染色体数目是较稳定的,为125-130。
5.怀山药叶片、茎段离体培养中,过氧化物酶活性和可溶性蛋白含量两者的变化与外部形态变化具有相关性。