论文部分内容阅读
目的:1.制备前列腺癌抗体造影剂抗PSA抗体-SPIO和抗HER-2/neu抗体-SPIO。利用电镜检测其粒径和形态,并测定两种抗体与SPIO的结合率。2.培养前列腺癌LNCaP细胞和PC-3细胞,并用免疫细胞化学方法检测两细胞PSA和HER-2/neu的表达。3.利用电镜、流式细胞仪、磁共振分析抗体造影剂对LNCaP细胞和PC-3细胞的靶向效果。方法:1.采用化学交联法制备两种抗体造影剂抗PSA抗体-SPIO和HER-2/neu抗体-SPIO。利用电镜进行检测,同时Folin-酚法检测抗体与SPIO的结合率。2.培养人前列腺癌LNCaP细胞和PC-3细胞;免疫细胞化学(SP法)分别检测两细胞PSA和HER-2/neu的表达。3.采用流式细胞术对样品(抗PSA抗体、抗HER-2/neu抗体、抗PSA抗体-SPIO、抗HER-2/neu抗体-SPIO)和两细胞(LNCaP细胞和PC-3细胞)的结合进行测试,测定McAb-SPIO的抗体活性。4.利用电镜检测McAb-SPIO进入细胞内的情况和活性,利用MR检测两McAb-SPIO对细胞的靶向增强作用。结果:1.经电镜观察和洗脱液的蛋白含量测定,得到抗体与SPIO有效的结合在一起,抗PSA抗体与SPIO交联率为96.5% ,抗HER-2/neu抗体与SPIO 95.7%。经电镜观察靶向造影剂粒径在50-100nm之间。2.免疫细胞化学检测LNCaP细胞PSA表达呈阳性,HER-2/neu表达为阴性。PC-3细胞HER-2/neu表达呈阳性,PSA表达为阴性。3.流式细胞术检测LNCaP与抗PSA抗体-SPIO以及抗PSA抗体结合率高,PC-3与抗HER-2/neu抗体-SPIO及抗HER-2/neu抗体结合率高。4.电镜检查LNCaP细胞中加抗PSA抗体-SPIO细胞浆内铁粒子量明显高于其他两组;PC-3细胞中加抗HER-2/neu抗体-SPIO组胞浆内铁粒子量明显高于其他。5.MR检查LNCaP细胞中加抗PSA抗体-SPIO组和PC-3细胞中加抗HER-2/neu抗体-SPIO组T2WI信号明显降低。结论:本实验成功构建了靶向前列腺癌LNCaP细胞PSA的探针抗PSA抗体-SPIO和靶向PC-3细胞HER-2/neu的探针抗HER-2/neu抗体-SPIO,均具有良好的理化性质和免疫活性,磁共振检测对细胞具有靶向性的增强效果。这两种探针的构建和进一步完善为激素依赖性和非依赖性前列腺癌的诊断提供了新思路和可信的技术手段,也为下一步动物实验乃至临床实验打下了坚实的基础。