沾化冬枣栽培区土壤抗病菌库的初步建立及其优势菌的分类鉴定

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本研究以琼脂块法从山东省沾化县冬枣栽培区的土壤中筛选出60株具有广谱抑菌性的放线菌,并保种构建一个简单的基础抗病菌库。从抗病菌库中分离得到两株分别对细菌和真菌有着很好的抑制效果的放线菌G2和L6,分类鉴定G2和L6,并优化L6的发酵条件。本研究旨在为冬枣果实病害生防药物的研发提供丰富的抗病菌种以及理论支持。研究结果如下:1、对山东沾化县冬枣栽培区的春秋两季的不同质地、不同栽种年限的土壤中的放线菌数量进行研究发现:沾化县冬枣栽培区土壤中,春季土壤中放线菌含量低于秋季土壤,有明显的季节性;根际土壤中放线菌数量高于根外土壤,呈现显著的根际效应;随着枣树种植年限的增加,放线菌数量呈现上升趋势;该地区砂质土壤中放线菌数量高于粘质土壤,这可能是因为砂土通风性较好,有利于放线菌的生长,总体说明影响放线菌数量的因素很多。2、本实验共分离到325株放线菌。用琼脂块法进行初筛,得到60株具有较好广谱抑菌性的放线菌,其中9株效果尤为明显,而通过对发酵液的抑菌活性测定,得到了两株放线菌G2和L6。G2具有广谱细菌抑菌性,L6具有广谱真菌抑菌性尤其对沾化冬枣黑斑病病原菌有显著抑菌性。3、对G2和L6进行分类鉴定,将它们初步鉴定为灰黄链霉菌(Streptomyces flavogriseus)和白黄链霉菌(Streptomyces alboflavus)。4、运用响应面优化试验对放线菌L6的发酵培养基和发酵工艺条件进行优化。得出L6发酵的最适培养基为:葡萄糖为30g/L,玉米粉为22.43g/L,蛋白胨为1g/L,黄豆粉为10g/L,磷酸氢二钾为0.27g/L,氯化钠为0.49g/L,硫酸镁为1.0g/L。最佳发酵工艺条件为:装液量100ml/500ml,pH值7.5,发酵时间145h,接种量为606ul/100ml,发酵温度28℃,转速140rpm。
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