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目的1.观察鞘内注射核转录因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对坐骨神经慢性挤压伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠痛阈和脊髓NF-κBp-p65、小胶质细胞活性、CX3CR1、p-p38MAPK、TNFα表达的影响。2.观察NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对体外TNFα诱导的BV-2细胞CX3CR1基因和蛋白表达的影响。3.观察鞘内注射白藜芦醇(Resveratrol,Res)对坐骨神经慢性挤压伤(CCI)大鼠痛阈和脊髓NF-κB-p65、小胶质细胞活性、CX3CR1、TNFα表达的调节,并探讨其对临床疼痛治疗的机制。方法1.288只成年雄性SD大鼠,体质量250～300 g,鞘内置管成功后,随机分8组(n=36):正常对照组:实验大鼠不做任何处置;假手术组:仅暴露左侧坐骨神经不结扎;假手术+PDTC组:假手术处理大鼠并经鞘内置管注入PDTC1000pmol/d;CCI组:大鼠CCI手术处理;CCI+PDTC组1:CCI处理大鼠分为2个亚组,分别在CCI术前1天和CCI第3天开始经鞘内置管注入PDTC100pmol/d;CCI+PDTC组2:CCI处理大鼠分为2个亚组,分别在术前1天和CCI第3天开始鞘内注入PDTC1000pmol/d;假手术+盐水组:假手术处理大鼠并鞘内注入生理盐水;CCI+盐水组:CCI术处理大鼠并经鞘内注入生理盐水。鞘内置管5 d后按每组处理不同,开始鞘内输注生理盐水和不同剂量的PDTC,鞘内注射1 d后分别建立大鼠CCI神经病理性疼痛模型和假手术模型,测定大鼠的痛敏值,并在鞘内注射4d后取脊髓腰膨大部进行免疫组化测定NF-κBp-p65、OX42、TNFα表达、Western Blot检测CX3CR1、p-p38MAPK蛋白表达、RT-PCR检测CX3CR1mRNA的表达、并且进行脊髓切片HE染色。2.采用体外培养的永生态小胶质细胞BV-2细胞,设立对照组和实验组,实验组经TNFα(20ng/ml)、TNFα+PDTC、PDTC孵育,于10min,20min,40min,60min,2h,3h,4h,6h,8h采用MTT方法和倒置显微镜分别测定小胶质细胞的生长率及形态改变,免疫细胞化学测定NF-κBp-p65表达,Western blot和RT-PCR检测CX3CR1蛋白和mRNA表达情况。3.252只成年雄性SD大鼠,体质量250～300 g,鞘内置管成功后,随机分7组(n=36):正常对照组:实验大鼠不做任何处置;假手术组:仅暴露左侧坐骨神经不结扎;假手术+Res组:假手术处理大鼠经鞘内置管注入Res;CCI组;CCI+Res组:大鼠分为2个亚组,分别在CCI术前1天和CCI第3天开始经鞘内置管注入Res500ug/d;假手术+盐水组:假手术处理大鼠并鞘内注入生理盐水;CCI+盐水组:CCI术处理大鼠并经鞘内注入生理盐水。按各组处理,鞘内置管5d后开始分别鞘内输注生理盐水和Res,鞘内注射1d后分别建立大鼠CCI神经病理性疼痛模型和假手术模型,测定大鼠的痛敏值,并在鞘内注射4 d后取脊髓腰膨大部进行免疫组化测定NF-κBp-p65、OX42、TNFα表达、Western Blot检测CX3CR1蛋白表达、并进行脊髓切片HE染色。结果1.CCI组与sham组比较大鼠术后各时点痛敏阈值明显下降,并在术后第3日降至最低点(P＜0.05),脊髓CX3CR1、p-p38MAPK、p-p65、OX42、YNFα的表达明显升高(P＜0.05)。PDTC+CCI组与CCI组比较,术后各时点大鼠痛敏阈值增高,脊髓CX3CR1、p-p38MAPK、p-p65、OX42、TNFα的表达下降(P＜0.05)。HE染色假手术+PDTC组与假手术+盐水组比较,未见明显脊髓组织病理损伤。2.TNFα刺激后BV-2细胞形态突起增粗;刺激20 min内NF-κBp-p65核表达细胞显著增多(P＜0.05),1 h达高峰,TNFα诱导的CX3CR1蛋白和mRNA表达分别于4h和2h达到高峰,PDTC(100μmol/l)可抑制TNFα诱导的NF-κBp-p65核表达,明显降低了TNFα诱导的CX3CR1蛋白和mRNA表达。3.CCI组与sham组比较大鼠术后各时点痛敏阈值明显下降,并在术后第3日降至最低点(P＜0.05),脊髓CX3CR1、p-p65、OX42、TNFα的表达明显升高(P＜0.05)。Res+CCI组与CCI组比较,术后各时点大鼠痛敏阈值增高,脊髓CX3CR1、p-p65、OX42、TNFα的表达下降(P＜0.05)。HE染色假手术+Res组与假手术+盐水组比较,未见明显脊髓组织病理损伤。结论1.鞘内给予PDTC可剂量依赖性地减轻CCI大鼠的病理性疼痛,并抑制脊髓CX3CR1、p-p38MAPK、p-p65、TNFα的表达和小胶质细胞活性。活化NF-κB通路可能通过上调脊髓CX3CR1、p-p38MAPK、TNFα的表达和小胶质细胞活性而参与了神经病理性疼痛的发生。2.TNFα可激活BV-2细胞NF-κB通路,改变细胞形态,使细胞体积增大突起增粗,增加细胞CX3CR1蛋白和mRNA表达,其激活的细胞内机制可能与核因子-κB的活化有关。3.鞘内给予Res可减轻CCI大鼠的病理性疼痛,并抑制脊髓CX3CR1、p-p65、TNFα的表达和小胶质细胞活性,这可能成为Res止痛作用的机制之一。