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背景
巨大儿（macrosomia）是指出生体重超过4,000g的足月活产新生儿。并且，其在全球范围内的发生率逐渐升高。分娩巨大儿不仅使肩难产、产后大出血等不良妊娠结局的发生风险升高。而且，出生时期的肥胖对新生儿的影响会延续至其儿童期或成年后，巨大儿更有可能在其成年后罹患各种代谢性疾病，比如肥胖症、糖尿病等。巨大儿的发生虽与妊娠期糖尿病（GDM）有关，但随着近年来对GDM的筛查普及以及规范化管理，GDM孕妇分娩巨大儿率逐渐下降，而非GDM巨大儿发生率却不断上升，其具体分子机制尚不明确。如何预防分娩巨大儿带来的健康问题，如何将成年疾病的预防关口提前已成为当今公共卫生领域的研究热点。因此，揭示非GDM巨大儿的发生机制，寻求更有效的预防和干预手段，对提高人口素质具有重要意义。
本实验室前期研究表明，非GDM巨大儿脐血中血脂成分与对照组相比发生明显变化，并且胎盘中与脂肪酸转运相关的重要蛋白PPARG、FAT/CD36发生明显改变，因此我们推测巨大儿胎盘中调节脂质代谢的重要通路--PPARs通路可能发生了改变，影响了脂质转运和代谢，并进一步探讨这一通路改变的可能机制。有一些研究表明，非编码RNA参与调节胎盘的发育和功能维持，microRNA(miRNA)表达紊乱与胎儿生长发育异常密切相关。为此，本研究以非GDM巨大儿及正常出生体重儿为研究对象，通过检测胎盘与PPARs通路上转录因子PPARA、PPARD以及其他下游靶基因的mRNA以及蛋白质表达水平，分析它们和巨大儿发生的关系，并进一步分析该通路的变化是否受miRNA调控。旨在探讨胎盘PPARs信号通路介导的脂质转运及相关的miRNA与非GDM巨大儿发生的关系，以期为揭示非GDM巨大儿的发生机制提供科学依据。
材料与方法
1.研究对象：采用病例-对照研究设计，以于2014年6月至2016年6月期间在温州医科大学附属第二医院妇产科进行产检并分娩的产妇及新生儿为研究对象。病例组（巨大儿组）为出生体重≥4,000g的新生儿和产妇，对照组（正常出生体重儿组）为随机选择的出生体重在2,500-3,999g，且与巨大儿出生时间相差3天以内的新生儿和产妇。孕妇入选标准为：①正常妊娠，②单胎、足月分娩，③糖耐量试验正常且新生儿无先天畸形；排除标准为：①产妇孕前有常见慢性疾病如糖尿病、高血压等；②有妊娠合并症者如糖尿病、高血压、心脏病等；③有妊娠并发症者如胎盘异常、先兆子痫等；④新生儿先天畸形者；⑤患有严重急、慢性传染性疾病；⑥患有先天性疾病与严重遗传学疾病者。
2.研究方法：采用问卷调查和实验室检测结合的方法。①通过问卷调查以及医院信息系统获得产妇以及新生儿的基本情况。②分别采用QuantifyRealTimePCR（qRT-PCR）和WesternBlot进行检测胎盘上与脂质转运和代谢相关的基因（PPARA、PPARD、RXRa、FATP1、FABPpm、FABP3、LPL、PLTP、LXRa）的mRNA和/或蛋白的表达水平。用qRT-PCR检测miRNA的表达水平。③采用多因素logistic回归分析影响与巨大儿发生有关的因素。④应用SPSS24.0软件进行数据分析。
结果
1.产妇及新生儿基线资料分析:本研究收集到病例组和对照组各42例。基线资料结果显示，巨大儿组产妇年龄、孕期增重、剖宫产比例及男性胎儿所占比例均高于对照组（P＜0.05），而其他因素如孕前BMI、孕周等在两组间并未发现统计学差异。
2.胎盘PPARs通路基因的表达水平：结果发现，巨大儿胎盘PPARA（P=0.033）、FABPpm（P=0.009）、FABP3（P=0.015）和LXRa（P=0.001）基因的mRNA表达量均高于对照组，而其他5个基因的mRNA表达水平在两组之间无统计学差异。此外，巨大儿胎盘中PPARA、FABPpm的蛋白水平高于对照组（P＜0.01）。进一步的性别分层分析显示，结果显示，在男性新生儿中，巨大儿组的PPARA、FABPpm、LXRa基因的mRNA表达水平显著地高于对照组（P＜0.05），在女性新生儿中，基因表达水平在两组间均没有统计学差异。按产妇年龄的分层分析显示，在高产妇年龄组（产妇年龄≥28.5岁）中，巨大儿组的FABPpm、LXRa基因的mRNA表达水平显著地高于对照组（P＜0.05），PPARA和FABP3表达在两组间没有统计学意义差异；在低产妇年龄组（产妇年龄＜28.5岁）中，巨大儿组LXRa基因的mRNA表达水平高于对照组，其他基因无统计学差异。按照孕期增重的分层分析显示，结果显示在孕期增重过多的层中，巨大儿组的FABPpm、FABP3、LXRa基因的mRNA表达水平显著地高于对照组（P＜0.05）。但孕期增重正常和低孕期增重不足层中，基因表达水平在两组间均没有统计学差异。
3.PPARs通路基因表达与新生儿出生体重的相关分析：PPARs通路脂质转运相关基因表达水平与新生儿出生体重之间的相关分析显示，FABPpm的mRNA表达量在巨大儿组中（rs=0.411，P=0.007）和对照组中（rs=0.322，P=0.043）均与出生体重呈现有意义的正相关关系。其他基因表达水平与出生体重未显示有意义的相关关系。
4.miRNA的表达水平分析：巨大儿胎盘中miR-27b的表达水平低于对照组，（P=0.001），而miR-17和miR-34a在巨大儿胎盘中有下降的趋势，但是差异没有统计学意义。分层之后，男性和女性新生儿中，巨大儿组miR-27b表达水平显著地低于对照组（P＜0.01）。在高年龄产妇层中，巨大儿组的miR-27b表达水平显著地低于对照组（P＜0.01），在低年龄产妇层中无统计学差异。
5.miRNA表达与新生儿出生体重的相关分析：进一步分析三种miRNA的表达水平与新生儿出生体重之间的相关关系，结果显示，在巨大儿组中，miR-34a的表达量与出生体重呈现有意义的负相关关系（rs=-0.353，P=-0.035），而miR-17和miR-27b与出生体重未发现显著的相关关系。在对照组中，三种miRNA的表达量与新生儿出生体重均未发现有意义的相关关系（P＞0.05）。
6.巨大儿发生风险的影响因素分析：单因素回归分析发现，胎儿性别，产妇年龄，孕期增重，PPARA、FABPpm、FABP3、LXRa的mRNA表达量以及miR-27b的表达量与巨大儿的发生均显示有统计学意义的关联。进一步的多因素logistic分析结果显示，在控制了可能的混杂因素之后，miR-27b和LXRa的表达量仍有与巨大儿发生风险相关联，即miR-27b低表达和LXRa高表达会增加巨大儿的发生风险。
结论
1.非GDM巨大儿胎盘组织中PPARs信号通路上多个基因表达上调，表明胎盘脂质转运增强，可能为非GDM巨大儿发生的机制之一。
2.多因素logistic回归分析显示，非GDM巨大儿胎盘中miR-27b的低表达和LXRa基因mRNA的高表达，增大巨大儿发生风险。
巨大儿（macrosomia）是指出生体重超过4,000g的足月活产新生儿。并且，其在全球范围内的发生率逐渐升高。分娩巨大儿不仅使肩难产、产后大出血等不良妊娠结局的发生风险升高。而且，出生时期的肥胖对新生儿的影响会延续至其儿童期或成年后，巨大儿更有可能在其成年后罹患各种代谢性疾病，比如肥胖症、糖尿病等。巨大儿的发生虽与妊娠期糖尿病（GDM）有关，但随着近年来对GDM的筛查普及以及规范化管理，GDM孕妇分娩巨大儿率逐渐下降，而非GDM巨大儿发生率却不断上升，其具体分子机制尚不明确。如何预防分娩巨大儿带来的健康问题，如何将成年疾病的预防关口提前已成为当今公共卫生领域的研究热点。因此，揭示非GDM巨大儿的发生机制，寻求更有效的预防和干预手段，对提高人口素质具有重要意义。
本实验室前期研究表明，非GDM巨大儿脐血中血脂成分与对照组相比发生明显变化，并且胎盘中与脂肪酸转运相关的重要蛋白PPARG、FAT/CD36发生明显改变，因此我们推测巨大儿胎盘中调节脂质代谢的重要通路--PPARs通路可能发生了改变，影响了脂质转运和代谢，并进一步探讨这一通路改变的可能机制。有一些研究表明，非编码RNA参与调节胎盘的发育和功能维持，microRNA(miRNA)表达紊乱与胎儿生长发育异常密切相关。为此，本研究以非GDM巨大儿及正常出生体重儿为研究对象，通过检测胎盘与PPARs通路上转录因子PPARA、PPARD以及其他下游靶基因的mRNA以及蛋白质表达水平，分析它们和巨大儿发生的关系，并进一步分析该通路的变化是否受miRNA调控。旨在探讨胎盘PPARs信号通路介导的脂质转运及相关的miRNA与非GDM巨大儿发生的关系，以期为揭示非GDM巨大儿的发生机制提供科学依据。
材料与方法
1.研究对象：采用病例-对照研究设计，以于2014年6月至2016年6月期间在温州医科大学附属第二医院妇产科进行产检并分娩的产妇及新生儿为研究对象。病例组（巨大儿组）为出生体重≥4,000g的新生儿和产妇，对照组（正常出生体重儿组）为随机选择的出生体重在2,500-3,999g，且与巨大儿出生时间相差3天以内的新生儿和产妇。孕妇入选标准为：①正常妊娠，②单胎、足月分娩，③糖耐量试验正常且新生儿无先天畸形；排除标准为：①产妇孕前有常见慢性疾病如糖尿病、高血压等；②有妊娠合并症者如糖尿病、高血压、心脏病等；③有妊娠并发症者如胎盘异常、先兆子痫等；④新生儿先天畸形者；⑤患有严重急、慢性传染性疾病；⑥患有先天性疾病与严重遗传学疾病者。
2.研究方法：采用问卷调查和实验室检测结合的方法。①通过问卷调查以及医院信息系统获得产妇以及新生儿的基本情况。②分别采用QuantifyRealTimePCR（qRT-PCR）和WesternBlot进行检测胎盘上与脂质转运和代谢相关的基因（PPARA、PPARD、RXRa、FATP1、FABPpm、FABP3、LPL、PLTP、LXRa）的mRNA和/或蛋白的表达水平。用qRT-PCR检测miRNA的表达水平。③采用多因素logistic回归分析影响与巨大儿发生有关的因素。④应用SPSS24.0软件进行数据分析。
结果
1.产妇及新生儿基线资料分析:本研究收集到病例组和对照组各42例。基线资料结果显示，巨大儿组产妇年龄、孕期增重、剖宫产比例及男性胎儿所占比例均高于对照组（P＜0.05），而其他因素如孕前BMI、孕周等在两组间并未发现统计学差异。
2.胎盘PPARs通路基因的表达水平：结果发现，巨大儿胎盘PPARA（P=0.033）、FABPpm（P=0.009）、FABP3（P=0.015）和LXRa（P=0.001）基因的mRNA表达量均高于对照组，而其他5个基因的mRNA表达水平在两组之间无统计学差异。此外，巨大儿胎盘中PPARA、FABPpm的蛋白水平高于对照组（P＜0.01）。进一步的性别分层分析显示，结果显示，在男性新生儿中，巨大儿组的PPARA、FABPpm、LXRa基因的mRNA表达水平显著地高于对照组（P＜0.05），在女性新生儿中，基因表达水平在两组间均没有统计学差异。按产妇年龄的分层分析显示，在高产妇年龄组（产妇年龄≥28.5岁）中，巨大儿组的FABPpm、LXRa基因的mRNA表达水平显著地高于对照组（P＜0.05），PPARA和FABP3表达在两组间没有统计学意义差异；在低产妇年龄组（产妇年龄＜28.5岁）中，巨大儿组LXRa基因的mRNA表达水平高于对照组，其他基因无统计学差异。按照孕期增重的分层分析显示，结果显示在孕期增重过多的层中，巨大儿组的FABPpm、FABP3、LXRa基因的mRNA表达水平显著地高于对照组（P＜0.05）。但孕期增重正常和低孕期增重不足层中，基因表达水平在两组间均没有统计学差异。
3.PPARs通路基因表达与新生儿出生体重的相关分析：PPARs通路脂质转运相关基因表达水平与新生儿出生体重之间的相关分析显示，FABPpm的mRNA表达量在巨大儿组中（rs=0.411，P=0.007）和对照组中（rs=0.322，P=0.043）均与出生体重呈现有意义的正相关关系。其他基因表达水平与出生体重未显示有意义的相关关系。
4.miRNA的表达水平分析：巨大儿胎盘中miR-27b的表达水平低于对照组，（P=0.001），而miR-17和miR-34a在巨大儿胎盘中有下降的趋势，但是差异没有统计学意义。分层之后，男性和女性新生儿中，巨大儿组miR-27b表达水平显著地低于对照组（P＜0.01）。在高年龄产妇层中，巨大儿组的miR-27b表达水平显著地低于对照组（P＜0.01），在低年龄产妇层中无统计学差异。
5.miRNA表达与新生儿出生体重的相关分析：进一步分析三种miRNA的表达水平与新生儿出生体重之间的相关关系，结果显示，在巨大儿组中，miR-34a的表达量与出生体重呈现有意义的负相关关系（rs=-0.353，P=-0.035），而miR-17和miR-27b与出生体重未发现显著的相关关系。在对照组中，三种miRNA的表达量与新生儿出生体重均未发现有意义的相关关系（P＞0.05）。
6.巨大儿发生风险的影响因素分析：单因素回归分析发现，胎儿性别，产妇年龄，孕期增重，PPARA、FABPpm、FABP3、LXRa的mRNA表达量以及miR-27b的表达量与巨大儿的发生均显示有统计学意义的关联。进一步的多因素logistic分析结果显示，在控制了可能的混杂因素之后，miR-27b和LXRa的表达量仍有与巨大儿发生风险相关联，即miR-27b低表达和LXRa高表达会增加巨大儿的发生风险。
结论
1.非GDM巨大儿胎盘组织中PPARs信号通路上多个基因表达上调，表明胎盘脂质转运增强，可能为非GDM巨大儿发生的机制之一。
2.多因素logistic回归分析显示，非GDM巨大儿胎盘中miR-27b的低表达和LXRa基因mRNA的高表达，增大巨大儿发生风险。