论文部分内容阅读
多杀性巴氏杆菌(pasteurella multocida,Pm)为革兰氏阴性、球杆状或短杆状的人畜共患致病菌,根据其荚膜抗原不同可以分为A、B、D、E和F 5个荚膜血清型,根据脂多糖抗原可分为1~16个血清型。牛源A型多杀性巴氏杆菌为条件性致病菌,常因运输应激诱发疾病,主要引起牛肺炎和呼吸道疾病综合征。本课题组前期对2017年之前从重庆、云南、四川分离鉴定的20株牛源多杀性巴氏杆菌(A型18株、F型2株)进行了毒力相关基因及药物敏感性等研究,本研究的目的是进一步比较分析2017~2019年分离鉴定的30株多杀性巴氏杆菌毒力相关基因和药物敏感性是否存在差异,我们采用PCR对30株多杀性巴氏杆菌进行毒力相关基因扩增,K-B试纸法药敏分析,为重庆、云南、四川等地区多杀性巴氏杆菌流行病学调查和防治提供参考。1.毒力相关基因分析本研究对分离的30株多杀性巴氏杆菌的毒力相关基因分布进行PCR检测,选择了7大类共25种毒力相关基因,包括外膜蛋白基因(ompA、ompH、oma87、plpB、Pm0979、Pm0442),黏附素A(hadA),粘附因子基因(ptfA、fimA、hsf-1、pfhA、tadD),铁离子摄取基因(exbB、exbD、tonB、hgbA、hgbB、fur),超氧化物歧化酶基因(sodA、sodC、tbpA),唾液酸基因(nanB、nanH),透明质酸酶基因(PmHAS),毒素(toxA),统计比较各基因阳性检出率和分布情况。实验结果显示,30株多杀性巴氏杆菌中,除hgbB、Hsf-1、nanH、nanB、toxA 5种毒力相关基因均未扩增出相应的目的条带外,30株Pm均含有ompA、ompH、oma87、plpB、Pm0979、Pm0442、hadA、ptfA、fimA、tadD、fur、exbD、tonB、hgbA、hgbB、sodA、sodC、tbpA、pfhA、PmHAS等20种毒力相关基因,目的条带与预期一致,检出率100%。以上结果表明,来自西南地区的不同牛场流行的多杀性巴氏杆菌存在一定相关性,不同菌株之间毒力相关基因分布一致。与前期(2017年之前)研究结果比较分析,发现阳性检出率有差异的毒力相关基因主要包括omp87、nanB、nanH、hsf-1、tbpA、tonB、hgbB,结果显示,omp87、tonB、tbpA等基因检出率有所提高,提示这3种毒力基因在菌株中分布呈一定上升趋势;nanB、nanH、hsf-1、hgbB、toxA等5种毒力相关基因可能不是影响毒力的关键基因。2.药物敏感性分析本研究采用K-B试纸法检测分离的30株牛源A型多杀性巴氏杆菌对29种常用抗生素的药物敏感性。试验结果表明,30株多杀性巴氏杆菌对四环素类、头孢菌素类、氨基糖苷类、喹诺酮类抗生素药物敏感;对新霉素、苯唑西林、丁胺卡那霉素、复方新诺明、大环内酯类等药物不敏感。不同地区的分离株药物敏感性趋势相近。与前期试验对比差异不大,提示西南地区近几年流行菌株的药物敏感性变化不大,用以上敏感药物对西南地区多杀性巴氏杆菌病防治依旧有效。