目的:　　 食物过敏是当今重大的卫生学问题，食物过敏原的鉴定、纯化并制备标准化的过敏原，是食物过敏性疾病诊断和治疗的中心环节。本研究的目的是分别从分析过敏原和分析待检IgE多态性两方面入手，力争解决当前血清特异性IgE检测所存在的问题。首先，以梭子蟹为研究对象，过敏患者血清中的特异性抗体IgE为“探针”，对梭子蟹中的主要过敏原组分进行分析;其次，以蟹过敏患者为研究对象，分析蟹过敏患者血清特异性IgE所针对过敏原的异质性。此外，选择甲壳类动物共同的过敏原-原肌球蛋白中的一段含有3个抗原表位的多肽，为重组表达对象，重组表达此段多肽，采用原核生物（大肠杆菌）作为表达系.统，制备原肌球蛋白肽段的多肽片段，为今后进行不同过敏原关键表位的串联体表达提供实验基础。　　 方法:　　 1.梭子蟹过敏原组分的分析:通过去脂、抽提梭子蟹的总蛋白，SDS-PAGE分析蛋白组分，以蟹过敏患者血清中的特异性IgE作为“探针”，经western-blot技术，分析梭子蟹中的主要与特异性IgE结合的组分。　　 2.蟹过敏患者特异性IgE所针对的过敏原异质性分析:选取50例蟹过敏患者血清，经western-blot技术分析不同的患者血清中的特异性IgE抗体多态性，即分析蟹过敏患者血清特异性IgE所针对的过敏原个体间存在的异质性。　　 3.原肌球蛋白中TM32a的重组表达及免疫活性鉴定:选择原肌球蛋白中的一段含有3个抗原表位的多肽（简称为TM32a）。合成TM32a的DNA序列，选择pET42a为载体，EcoRI和XhoI双酶切构建质粒载体，克隆宿主菌Top10扩增重组质粒，利用最常见的原核表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE)，以IPTG诱导蛋白表达，并利用载体上的所携带的His标签蛋白，用镍离子纯化柱纯化出单一组分的TM32a蛋白，免疫印迹法鉴定该目的蛋白的免疫活性。　　 结果:　　 1.梭子蟹过敏原组分的分析:梭子蟹的总蛋白粗提液中共观察到9条主要蛋白条带。在以阳性混合血清为探针的印迹中，94kD、74kD、70kD、48kD、43kD、40kD和36kD处均出现了阳性反应条带，但蛋白浓度较高的74kD和70kD的蛋白与混合血清反应并不是最强的，相反，蛋白含量中等的94kD的蛋白与混合血清反应最强。　　 2.蟹过敏患者血清特异性IgE所针对的过敏原的异质性分析:以单例蟹患者血清为研究对象的western-blot实验中，发现不同的患者血清中的特异性IgE存在明显的异质性，即不同人的反应蛋白数量和种类都有所不同，其中:①1种蛋白为主要过敏原;②两种以上蛋白均为主要过敏原;③没有强反应的主要过敏原，而仅有几种较轻反应的过敏原。统计发现，其中以36kD的蛋白反应率最高，可达80％。　　 3.原肌球蛋白中TM32a的重组表达及免疫活性鉴定:合成的原肌球蛋白中的TM32a的DNA序列大小为96bp左右，与pET-42a连接构建质粒载体，大小为6030bp左右，将构建好的质粒转化大肠杆菌BL21(DE)，IPTG诱导表达后，获得大小为34kD左右的重组蛋白TM32a，将重组蛋白经镍离子柱纯化柱纯化后，获得单一组分的34kD大小的TM32a，并经免疫印迹法证明其具有免疫活性。　　 结论:　　 1.梭子蟹中有7个主要过敏原组分，其中94kD的过敏原与混合患者血清的反应强度最强。　　 2.蟹过敏患者血清中的特异性IgE抗体所针对的过敏原存在明显的异质性，共确定了3种不同的患者血清中特异性IgE所针对的过敏原类型，分析9种主要过敏原的反应率，其中反应率最高的过敏原蛋白是36kD的蛋白。　　 3.重组表达的原肌球蛋白中的TM32a蛋白，该目的蛋白的分子量大小为34kD左右，免疫印迹法鉴定该重组蛋白具有免疫活性。