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双组分组氨酸激酶(以下简称TCHK)信号途径在真菌体内参与多种生命活动,但目前,人们对灰霉病菌的TCHK信号途径还缺乏深入的了解。已有研究表明,二甲酰亚胺类杀菌剂(以下简称DCFs)通过激活TCHK信号途径而抑制灰霉病菌生长,但该药剂具体的作用位点尚不清楚,因此,研究灰霉病菌TCHK信号途径对于了解DCFs的作用机制有重要的理论和现实意义。本课题利用农杆菌介导的真菌转化系统、通过基因敲除和互补的方法研究了灰霉病菌TCHK途径上五个重要元件BOS1、BRRG-1、BOS4、BOS5和BOS2的生物学功能,结果发现：1) BRRG-1、BOS4、BOS5和BOS2的敲除突变体均不形成气生菌丝和分生孢子；BOS5敲除突变体的菌丝严重扭曲畸形、多分枝、顶端膨大。2)药剂敏感性测定发现,只有BOSl基因敲除突变体对DFCs表现抗性,而其它四个基因敲除突变体对该类药剂表现更加敏感；另外,BOS1上点突变可导致病菌对DFCs产生抗性。3)渗透压敏感性测定发现,所有五个元件的敲除突变体对NaCl和KCl产生的离子型渗透压力表现敏感,而对山梨醇等中性渗透压力的敏感性无改变。4)氧化压力敏感性测定发现,除BOS1以外其他四个元件的敲除突变体对H202均表现敏感。5)致病性测定表明,灰霉病菌TCHK信号途径上的三个促分裂原活化蛋白(以下简称MAP)激酶BOS4、BOS5和BOS2与致病性密切相关,这些基因缺失突变体能正常侵染穿透寄主细胞但不能形成病斑。6)蛋白杂交结果显示,在正常培养条件下,BRRG-1、BOS4 (?)口BOS5敲除突变体内均检测不到BOS2磷酸化,表明这些组分位于BOS2的上游。本研究结果表明,灰霉病菌TCHK信号途径参与菌体致病性、产孢、生长发育等多种生命活动；BOS1应该是DFCs的靶标位点；此外,由于BOS4、BOS5和BOS2在病菌致病中发挥重要作用,它们可能成为潜在的新药靶。