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目的:优化变通香薷饮的提取工艺,初步探讨其抗流感病毒的作用,为其临床应用及制剂开发提供科学依据。方法:1.变通香薷饮的提取工艺优化。香薷挥发油:以加水量、浸泡时间和蒸馏时间为提取考察因素,以挥发油含量为评价指标,进行正交试验;β-CD包合香薄挥发油:以β-CD:油、包合温度和包合时间为包合考察因素,以包合物含油率、包合物得率为评价指标,进行正交试验;黄连:以乙醇浓度、料液比、提取次数和提取时间为考察因素,以盐酸小檗碱含量和浸膏得率为评价指标,进行正交试验;金银花、黄芩和连翘:以乙醇浓度、料液比、提取次数和提取时间为考察因素,以绿原酸含量、黄芩苷含量和连翘苷含量为评价指标,进行正交试验。上述正交试验结果均采用SPSS19.0软件进行分析,分别建立以其各指标为子目标的数学逐步回归模型,再采用Matlab 2009a外挂SGALAB工具箱beta 5008对其进行单目标、多目标遗传算法(Genetic Algorithm,GA)优化,搜索最优工艺。复方变通香薷饮:按上述方法优化提取得各浸膏粉或包合物,以处方量混匀,即得工艺优化后的变通香薷饮提取物(Optimized Flexible Xiangru Decoction Extract，OFE)。2.变通香薷饮在鸡胚内抗流感作用的实验研究。将OFE和传统煎煮的变通香薷饮(Traditional Flexible Xiangru Decoction Extract,TFE)的不同浓度药液与20EID5D流感病毒-H3N2等量混合,混合液中加入10 μL/mL双抗溶液(青霉素100U/mL,链霉素0.1 mg/mL),置37℃温箱中和1 h,立即接种于鸡胚的尿囊腔,0.2 mL/枚,置35℃孵箱中孵育48 h,再4℃过夜。收集每枚鸡胚的尿囊液进行血凝试验,评价药物在鸡胚内的抗病毒作用。3.变通香薷饮对流感病毒性肺炎模型小鼠的抗流感作用。在乙醚轻度麻醉下,经鼻滴入甲型流感病毒小鼠肺适应株A/PR/8/34,建立小鼠病毒性肺炎模型,并分别以OFE高、中、低剂量进行预防给药治疗,以达菲为阳性药设立阳性药对照组,同时设立病毒模型组及正常对照组。(1)试验前2天,各组灌胃给药,对照组给予等量蒸馏水灌胃。试验当日,各组(正常对照组除外)滴鼻感染病毒,于感染后第5日,处死解剖,摘取肺组织,称重,计算各组小鼠的肺指数和肺指数抑制率;记录各组小鼠肺组织的病理变化,并用10%福尔马林溶液固定,石蜡包埋,常规切片,HE染色,于光镜下观察各组小鼠肺组织的病理形态学变化;(2)试验前2天,各组灌胃给药,对照组给予等量蒸馏水灌胃。试验当日,各组(正常对照组除外)滴鼻感染病毒,从感染之日起,观察14天,每天记录小鼠的发病情况和死亡数,计算死亡保护率和延长生命率。结果:1.变通香薷饮的提取工艺优化。香薷挥发油的最优提取工艺为:加药材量1 1.7倍的水量,浸泡2 h后,再采用水蒸气蒸馏法蒸馏5.8 h,得挥发油量为1.66%;β-CD包合香薷挥发油的最优包合工艺为:β-CD:油8:1,包合温度57℃,包合2.4 h,包合物含油率、包合物得率分别可达82.83%、80.69%;黄连的最优提取工艺为:加10倍药材量的74%乙醇回流提取3次,每次1.2 h,盐酸小檗碱含量、浸膏得率分别可达8.80%、25.03%;金银花、黄芩和连翘的混合提取最优工艺为:加7倍药材量的50%乙醇回流提取3次,每次lh,金银花、黄芩和连翘中绿原酸、黄芩苷、连翘苷含量分别为2.64%,8.12%,1.75%。变通香薷饮的最优提取工艺为:以处方量混匀挥发油β-CD包合物、香薷干浸膏粉、黄连干浸膏粉及金银花、黄芩和连翘三药混合提取的干浸膏粉,即得工艺优化后的变通香薷饮提取物(OFE)。2.变通香薷饮在鸡胚内抗流感作用的实验研究。与病毒对照组比较,经尿囊腔途径给药,OFE高、中、低剂量组和TFE高、中剂量组鸡胚尿囊液中流感病毒载量明显降低(P<0.01);TFE低剂量组鸡胚尿囊液中流感病毒载量亦有降低(P<0.05)。OFE和TFE对鸡胚内流感病毒的复制增殖均有显著的抑制作用,呈一定的量效关系,且OFE优于TFE。3.变通香薷饮对流感病毒性肺炎模型小鼠的抗流感作用。OFE高、中、低剂量均能显著降低流感性肺炎小鼠的肺指数,提高肺指数抑制率,明显增加病毒感染小鼠的死亡保护率,延长存活时间,缓解流感病所致小鼠肺炎的病变情况。结论:1.实验确定的变通香薷饮提取工艺稳定可行,可为临床应用及制剂开发提供可行的依据。2.工艺优化后的变通香薷饮提取物(OFE)和传统煎煮的变通香薷饮(TFE)在鸡胚内均有一定的抑制流感病毒H3N2增殖的作用,呈一定的量效关系,且OFE比TFE抑制作用更为显著。3.体内实验证明,工艺优化后的变通香薷饮提取物(OFE)对流感病毒性肺炎模型小鼠亦有明显的抗流感病毒作用。