【摘 要】
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杨属（Populus）植物生长迅速、再生能力强，且具有易于无性繁殖和分布广泛的特点，是我国重要的造林绿化、工业用材树种。由于其多为人工林纯林，存在较严重的虫害，常常依赖化学农药防
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杨属（Populus）植物生长迅速、再生能力强，且具有易于无性繁殖和分布广泛的特点，是我国重要的造林绿化、工业用材树种。由于其多为人工林纯林，存在较严重的虫害，常常依赖化学农药防治，由此造成的害虫抗药性和环境污染等问题影响了杨树的生产和应用。植物组织培养技术和基因工程的快速发展，为优树的繁殖和抗虫转基因杨树的培育开辟了新途径。 本试验以华中农业大学杨树课题组自主选育的F1代优良株系LH04-8为实验材料，建立了离体再生体系，探讨影响植株再生的因素。然后利用本课题组已经建立的农杆菌介导遗传转化体系，将抗虫基因Cry1C+9C导入杨树，得到转抗虫基因Cry1C+9C的抗性植株。研究的主要结果如下： 1.以杨树的茎段和叶片为外植体，建立离体再生体系。结果表明： （1）研究了不同植物生长促进剂的组合和浓度对叶片不定芽再生的影响。试验中可以得到6-BA与NAA组合有利于不定芽诱导和芽体分化，分化增殖培养基为：MS+0.5mg/L6-BA+0.05mg/LNAA，其分化率为93.4%； （2）比较NAA和IBA对LH04-8杨试管苗不定根诱导的影响。最适生根培养基为：1/2MS+0.2mg/LIBA+0.05mg/LNAA+25g/L蔗糖+7g/L琼脂，生根率达到了95%； 2.以LH04-8无菌苗为转化受体材料，建立完整的遗传转化体系 （1）试验叶片和根对抗生素的敏感性。头孢霉素对农杆菌EHA105抑菌效果好，适宜浓度为200mg/L；叶片转化筛选培养阶段，卡那霉素适宜浓度为10-12mg/L；不定芽生根培养阶段，适宜浓度为10mg/L。 （2）通过根癌农杆菌介导Cry1C+9C基因转化杨树叶片。试验结果表明：预培养2d，用OD600值为0.8的菌液浸染8min，共培养2d，延迟筛选15d，在此转化体系下，其抗性芽获得率较其他条件下高。 （3）转化植株在含筛选抗生素的培养基上正常分化、生根，所获得的8个抗性芽经PCR检测，结果初步表明有2株的抗虫基因Cry1C+9C基因已转入杨树基因组中。
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