酵母细胞壁提取物对鸡新城疫疫苗免疫增强作用的研究

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酵母细胞壁提取物(Yeast cell wall products,YP)是一种从酵母细胞壁中提取的多糖类复合物,主要由β-葡聚糖和α-甘露寡糖以一定的比例组成。大量研究证实酵母细胞壁多糖可增强动物机体的体液免疫功能,但对鸡细胞免疫和肠道黏膜免疫调节作用的报道较少。本研究选用鸡作为研究对象,探究饲料中添加YP对其体液免疫、细胞免疫、肠道黏膜免疫及肠道菌群的影响,为进一步将其开发为免疫增强剂提供理论参考。1.添加YP对鸡体液免疫和肠道黏膜免疫的影响为探讨YP对鸡新城疫体液免疫和肠道黏膜免疫的调节作用,75只健康雏鸡按体重随机分为5组,每组15只,即YP 0.2%、0.1%和0.05%剂量组(饲料中添加),免疫对照组,空白对照组。YP各剂量组和免疫对照组于14日龄饮水免疫新城疫活疫苗,空白对照组不做免疫处理。分别于免疫前和免疫后1、2、3、4 W采集血液及粪便样本,HA-HI检测血清中新城疫特异性抗体滴度,ELISA法测定粪便上清中SIg A含量;试验结束后各组处死5只试验鸡,采集十二指肠样本,免疫组化法检测组织Ig A+细胞数量。结果显示,与免疫对照组相比,整个试验周期内0.05%剂量组血清HI滴度水平差异不显著(P>0.05),0.1%剂量组在免疫后2 W血清HI滴度极显著升高(P<0.01),0.2%剂量组血清HI滴度显著性升高(P<0.05);同时0.1%剂量组特异性NDV-SIg A含量及Ig A+细胞数量显著升高(P<0.05)。提示,添加YP可显著增强鸡新城疫疫苗的体液免疫和肠道黏膜免疫,其中以0.1%添加量为最佳。2.添加YP对鸡细胞免疫的影响为进一步探明YP对鸡新城疫疫苗免疫后细胞免疫的影响,60只健康雏鸡按体重随机分为3组,每组20只,即YP 0.1%剂量组、免疫对照组和空白对照组。YP组和免疫对照组分别于14、28日龄点眼滴鼻免疫新城疫活疫苗。分别于二免前、二免疫后1 W和3 W采集血液样本,分离血清,ELISA法检测血清中IFN-γ、IL-6、IL-4、TNF-β和TGF-β1含量;二免后1、3W各组取8只仔鸡,脱颈处死,摘取脾脏,MTT法检测脾脏淋巴细胞增殖活性,流式细胞术检测脾脏CD4+/CD8+比例;二免后1 W摘取脾脏和空肠,荧光定量法检测相关基因的相对表达量。结果显示,与免疫对照组相比,添加YP可显著提高鸡脾脏淋巴细胞对新城疫抗原的刺激指数(P<0.05),CD4+/CD8+比例升高(P>0.05),血清中IL-4、IL-6、TNF-β和IFN-γ均显著升高(P<0.05),显著性上调脾脏IL-6、TGF-β、TLR-5、T-bet和GATA-3 m RNA的相对表达量(P<0.05)和空肠CCR9、J-chain、p Ig R和TLR3 m RNA相对表达量。提示,YP可通过调节转录因子的活性促进细胞免疫。3.添加YP对鸡盲肠肠道菌群的影响为进一步探究YP对肠道菌群的影响,12只健康雏鸡按体重随机分为2组,每组6只,即YP0.1%剂量组和对照组。14日龄饮水免疫新城疫活疫苗,连续饲喂35 d后脱颈处死各组仔鸡,采集盲肠内容物,采用第二代16S测序技术对16S r RNA进行测序分析。结果显示,与对照组相比,添加YP后仔鸡肠道菌群Alpha多样性指数observed species、Chao1显著升高(P<0.05),组间区分明显;门水平上,厚壁菌门和软壁菌门相对丰度显著升高(P<0.01或P<0.05),拟杆菌门和变形菌门显著或极显著降低(P<0.01或P<0.05);科水平上,瘤胃菌科相对丰度显著升高(P<0.05),拟杆菌科、脱硫弧菌科和坦纳菌科相对丰度显著或极显著降低(P<0.01或P<0.05)。提示,添加YP可调节家禽肠道菌群的组成及相对丰度促进宿主健康。综上所述,饲料中添加酵母细胞壁提取物能显著增强鸡免疫新城疫活疫苗的免疫效果。添加0.1%YP可显著提高新城疫免疫鸡血清特异性HI滴度和细胞因子含量、肠道SIg A分泌水平、肠道Ig A+细胞数量及脾脏淋巴细胞增殖反应,上调免疫相关基因m RNA水平,改善盲肠微生物菌群。
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