氨基功能化碳纳米管敏感界面的构筑及其对生物分子的电化学检测

来源 :皖南医学院 | 被引量 : 1次 | 上传用户:zuo541018125
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目的:探讨氨基功能化碳纳米管参与构筑的敏感界面对癌胚抗原、槲皮素和山奈酚、多菌灵这三类生物分子的电化学行为及检测。方法:1.癌胚抗原(CEA)是一种重要的肿瘤标志物,可用于大肠癌、乳腺癌和肺癌等多种恶性肿瘤的鉴别诊断、病情监测及疗效评价。本研究利用氨基化碳管(NH2-MWCNT)、硫堇(THi)和纳米金颗粒(Au NPs)进行敏感界面构筑,通过NH2-MWCNT和THi上的-NH2端化学键合Au NPs,修饰到到玻碳电极(GCE)表面,进一步通过Au-N键固定抗体(anti-CEA)并用牛血清白蛋白(BSA)进行封闭后得到电化学免疫传感器可用于检测癌胚抗原。用扫描电镜(SEM)、电化学阻抗(EIS)和循环伏安法(CV)来表征免疫传感器的整个构筑过程,用差分脉冲伏安法(DPV)对该传感器上CEA的响应信号进行检测。同时对该免疫传感器的选择特异性、重现性和稳定性进行研究,并利用标准加入法对正常人血清进行实际样品分析。2.通过等离子聚合技术制备氨气等离子处理的多壁碳纳米管(pn-MWCNTs),以pn-MWCNTs为敏感界面材料,使用DPV和安培法实现对槲皮素(Que)和山奈酚(Kae)的同时检测。使用CV和EIS表征电极表面的变化。讨论电解液的p H值、富集电位和富集时间对槲皮素和山奈酚的伏安响应的影响,获得优化的实验条件;并通过优化条件下电极的抗干扰和稳定性实验,评价修饰电极的性能。进一步以氨气等离子处理多壁碳纳米管修饰敏感界面(pn-MWCNTs/GCE)检测血清中的槲皮素和山奈酚。3.通过EDC/NHS缩合反应将中-四(4-羧基苯基)卟吩修饰到pn-MWCNT的玻碳电极表面,制得敏感界面,用于检测多菌灵(CBZ)。用CV和EIS两种方法对修饰过程进行表征,确保修饰物到达电极表面。对实验中的pn-MWCNTs修饰量、缓冲液p H值和富集时间进行优化,并在优化条件下,使用DPV和安培法对多菌灵进行定量分析。研究修饰电极的稳定性和重现性后,对自来水和汇源橙汁中加入的多菌灵标准液进行加样回收实验。结果:1.在优化条件下,免疫传感器对CEA的检测在0.22-34ng m L-1范围内呈良好的线性关系,线性方程分别为ΔI/μA=38.52+10.18c/μM(R2=0.9965)(0.22-2ng m L-1)和ΔI/μA=57.54+0.31c/μM(R2=0.9973)(2-34ng m L-1),检测限(信噪比S/N为3)为0.003ng m L-1。在血清样本中的CEA的回收率在85.5-100.4%范围内。2.经安培法检测,敏感界面上槲皮素和山奈酚的浓度在0.05-4.55μM范围内与氧化峰电流线性关系良好,其线性方程为Que:i/μA=0.001+0.02c/μM(R2=0.9991);Kae:0.05+0.0196c/μM(R2=0.9902)。槲皮素和山奈酚的检测限均为0.05μM(S/N=3)。用于分析稀释血清样品的槲皮素和山奈酚时,两者的平均回收率分别为96.91和100.5%。3.通过I-t曲线检测,CBZ的浓度与电极上的电流响应成正比,在1-11μM CBZ浓度范围内,其线性方程为I/μA=0.0098+0.03112c/μM(R2=0.9984),对应检测限为0.18μM(信噪比为3)。在自来水和汇源果汁中进行回收实验,其回收率为自来水为96.3-102.8%,汇源橙汁为95.1-104.6%。结论:1.基于纳米金-硫堇-氨基化碳纳米管(Au NPs/THi/NH2-MWCNT)的免疫传感器对CEA进行检测,可作为临床上检测CEA的一种选择特异性强,检测灵敏度高,稳定重现性好的方法,为临床肿瘤指标提供检测参考依据。2.等离子处理的氨基化碳管敏感界面对槲皮素和山奈酚这两种具有相似结构和类似氧化电位的物质实现同步选择性检测分析,结果令人满意,可以用于实际样品的分析。3.卟吩-氨气等离子处理碳纳米管敏感界面具有重现稳定性好,在多菌灵的检测中具有检测限低、检测速度快等优点,为多菌灵检测提供了一个简单、灵敏、可靠的方法。
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