脑缺血后新生神经元的迁移及其树突生长研究

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目的:正常成年鼠脑内SVZ区和DG区不断产生神经干细胞,新生神经干细胞能够增殖、迁移、分化发育并整合进入已有的神经环路,这一过程对于维持生命体的正常生理活动有重要的意义。我们重点研究在脑缺血再灌后,SVZ和 DG区的神经发生。我们以前的研究已经表明,脑缺血再灌后,新生的神经干细胞会向缺血区迁移,但是脑缺血再灌后缺血区的这些神经干细胞是否来源 SVZ区,DG区的神经发生是否和正常鼠脑内一致还需要进一步研究,本文将重点研究在脑缺血再灌这一病理状态下,SVZ区神经干细胞的迁移情况以及 DG区新生神经干细胞的发育情况。  方法:利用脂质体将pMT44逆转录病毒载体导入GP2-293中构建出一定滴度的逆转录病毒。这种逆转录病毒只能够侵染增殖分化的细胞,且能稳定表达红色荧光蛋白,利用逆转录病毒的这种特性,我们可以选择性的标记出SVZ区的神经干细胞。线栓法制作大鼠脑缺血模型,再灌3d后,侧脑室注射病毒,以标记增殖细胞.分注射病毒后3d、7d、14d后,灌流取材切片,并用免疫荧光染色法加强标记,在免疫荧光显微镜下观察结果。同样的方法我们海马注射病毒可以标记出海马的新生神经干细胞,给予reelin抑制剂后采用免疫荧光法观察海马区神经干细胞的发育情况,采用水迷宫从行为学上检测大鼠的记忆力。  结果:⑴采用转染后浓缩上清的方法可以得到1×107的病毒上清;⑵脑缺血再灌后,注射病毒后的3d、7d、14d,侧脑室角的mcherry(+)细胞数目和迁移距离显著增加;⑶脑缺血再灌后17d,给予reelin抑制剂RAP组和单纯缺血组相比,树突长度以及顶树突数量显著下降;⑷脑缺血再灌后17d,给予reelin抑制剂RAP组和单纯缺血组相比,大鼠在水迷宫试验中寻找平台的潜伏期从第五天开始显著增加。  结论:①成年鼠脑缺血再灌后,SVZ区产生增殖的神经干细胞,这些神经干细胞会向缺血区发生迁移。②脑缺血再灌后,reelin参与成年脑脑缺血再灌后DG区神经干细胞的发育。
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