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目的:IARC在2012发布的最新数据表明肾癌的发病率超过337900人/年,超过143400人/年因罹患肾癌死亡。对于早期肾癌病人,根治性或部分肾切除术通常是首先选的治疗方式。但是,对于癌肿已经转移或难以手术切除的肾癌患者,系统化治疗不可或缺。肾癌中最常见的组织学类型是肾透明细胞癌,占到了所有肾癌组织学类型的90%。肾透明细胞癌来源于高表达多药耐药蛋白(MDR-1)的近曲小管上皮细胞,这导致了肾透明细胞癌患者接受化疗后容易发生继发性耐药。另一方面,尽管针对VEGF和mTOR的靶向药物以及近年流行的前景良好的免疫治疗药物的临床应用有所进展,但是病人对这些药物的完全应答率仍然很低。因此,进一步深入认识肾癌发生发展的分子机制和关键的调控因子、寻找新的治疗靶点或改进现有治疗手段以改善肾癌病人临床预后尤为重要。方法:1.从TCGA数据库获取肾癌患者表达谱数据,R语言环境下分析癌和癌旁组织基因表达情况,筛选差异表达的基因。选取有潜在研究意义的基因做高通量筛选,选出对肾癌细胞增殖能力有明显影响的基因。2.选取在高通量筛选中明显影响肾癌细胞增殖能力的功能基因作为目的基因,结合TCGA的临床信息和表达谱数据做Kaplan-Meier和Log-Rank分析。同时在组织样本中验证目的基因在癌和癌旁组织的表达情况。3.用CCK-8、Celigo,Flow Cytometry和小鼠移植瘤模型分别检测了PLEKHO1在体内或体外对肿瘤细胞活性的影响。4.我们用PLEKHO1敲减组和对照组的786-O细胞的总RNA提取物做了基因表达谱芯片,并使用通路分析软件(IPA)分析了PLEKHO1可能参与的信号通路。结果:1.通过对TCGA数据库中肾癌患者表达谱数据的分析,我们发现PLEKHO1在肾癌组织中的表达水平较癌旁正常肾组织明显增高。并且,在高通量增殖筛选中我们发现:人为降低PLEKHO1表达能明显抑制肾癌细胞(786-O)的增殖活性。2.Kaplan-Meier和Log-Rank分析表明:PLKEHO1高表达的肾癌患者的中位生存期明显较PLKEHO1低表达的患者要缩短。即肾癌组织中PLEKHO1的异常表达对肾癌患者的预后有显著影响。RT-PCR验证结果表明:PLEKHO1的mRNA水平在肾癌组织中明显高于癌旁的正常肾组织。3.使用RNAi技术降低PLEKHO1在Caki-1和786-O中的内源性表达,并通过Celigo和CCK-8检测细胞的增殖活性发现:降低PLEKHO1的表达能明显抑制Caki-1和786-O细胞系的增殖活性。4.Flow Cytometry检测结果表明,下调PLEKHO1的内源性表达能明显促进肾癌细胞系的凋亡。5.小鼠移植瘤模型结果表明,稳定敲减PLEKHO1的786-O细胞在小鼠体内的成瘤能力明显减弱,成瘤体积、重量和瘤体生长速度明显低于对照组。6.基因芯片和共表达分析结果表明,PLEKHO1可能通过Hippo和MAPK/JNK信号通路发挥作用。结论:本研究的结果综合表明,PLEKHO1作为促瘤因子可能通过Hippo和MAPK/JNK信号通路促进肿瘤细胞增殖同时抑制细胞凋亡实现对肿瘤进展的调控。这不同于以往所报道的PLEKHO1作为潜在的肿瘤负调控因子的角色。本研究中的数据提供了一个全新的视角认识肾透明细胞癌发展的分子机制,为寻找新的肾癌治疗靶点提供了新思路。