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目的通过检测乙肝病毒携带孕妇分娩新生儿脐血乙肝病毒标志物,了解乙肝病毒宫内感染率,评价孕晚期注射乙肝免疫球蛋白( Hepatitis B immunoglobulin,HBIG)预防宫内感染的免疫效果;通过检测随访婴幼儿的乙肝病毒标志物,了解免疫成功率和免疫失败率,评价乙肝疫苗和乙肝免疫球蛋白主被动联合免疫效果;并通过检测乙肝病毒宫内感染婴幼儿外周血中树突状细胞(Dentritic cell,DC)和T细胞亚群数量及细胞因子含量,探讨免疫失败的机制,为进一步提高宫内感染婴幼儿的免疫效果,保护高危儿提供科学理论依据。方法选择在济南市妇幼保健院分娩的HBsAg阳性孕妇(318例)及新生儿(324例)进行临床流行病学研究,分别以孕妇产前是否注射HBIG、分娩方式及乙肝病毒携带类型分组,检测新生儿脐血乙肝病毒表面标志物,观察各组的宫内感染率;并对179例乙肝病毒携带孕妇分娩的主被动联合免疫的新生儿及164例正常孕妇分娩的主动免疫的新生儿进行随访,于一岁时抽取肘静脉血检测乙肝病毒标志物,观察免疫效果;同时根据婴幼儿一岁时乙肝病毒标志物的结果将宫内感染婴幼儿分为免疫成功组和免疫失败组,应用酶联免疫吸附法检测两组婴幼儿外周血IL-12、IFN-γ和IL-23的表达含量,流式细胞术检测两组婴幼儿外周血DC、T细胞的数量,采用两样本t检验比较两组的差异,同时采用两变量Spearman相关对DC、T细胞和细胞因子进行相关分析,分析宫内感染主被动联合免疫失败的机制。结果1.乙肝病毒宫内感染率:乙肝病毒携带孕妇分娩的新生儿宫内感染率为17.59%(57/324),其中孕晚期注射HBIG的乙肝病毒携带孕妇分娩的新生儿宫内感染率为9.76%(16/164),孕晚期未注射HBIG的乙肝病毒携带孕妇分娩的新生儿宫内感染率为25.63%(41/160),差异有统计学意义(P<0.05),孕晚期注射HBIG能有效阻断HBV宫内感染;孕妇为HBsAg、HBeAg双阳性者,宫内感染率最高,为25.19%(34/135)。2.交互作用分析结果:将孕妇HBeAg状态与孕晚期是否注射HBIG进行交互检验分析,发现两因素具有正相加交互作用,归因交互效应(I(AB))为6.57;归因交互效应百分比(AP(AB))为57.84%;纯因子间归因交互效应百分比(AP*(AB))为63.44%。将分娩方式与孕晚期是否注射HBIG进行交互检验分析,发现两因素具有正相加交互作用,I(AB)= 0.610,AP(AB) =8.6%,AP*(AB) =9.95%。3.新生儿主被动联合免疫效果:正常孕妇分娩的婴幼儿,免疫成功率为88.67%(133/150),免疫失败率为11.33%(17/150);乙肝病毒携带孕妇分娩的宫内感染婴幼儿,免疫成功率为59.18%(29/49),免疫失败率为40.82%(20/49);乙肝病毒携带孕妇分娩的非宫内感染婴幼儿,免疫成功率为77.05%(94/122),免疫失败率为22.95%(28/122);各组婴幼儿慢性乙肝携带率分别是0.67% (1/150),18.37 % (9/49)和1.64% (2/122)。4.婴幼儿外周血DC亚群、T细胞亚群检测结果:(1)DC亚群:免疫成功组MDC(myeloid dendritic cells,MDC)的百分比为0.31%±0.11%,绝对数为(20.62±6.32)×l06/L,PDC(plasmacytoid dendritic cells,PDC)的百分比为0.28%±0.11%,绝对数为(18.31±5.01)×l06/L;免疫失败组MDC的百分比为0.18%±0.07%,绝对数为(12.41±4.32)×l06/L;PDC的百分比为0.16%±0.08%,绝对数为(11.74±6.83)×l06/L。免疫失败组MDC和PDC的百分比及绝对数均低于免疫成功组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)T亚群:免疫失败组CD4+百分比32.94%±7.58%和CD4+/CD8+的比值1.13±0.50均低于免疫成功组CD4+百分比39.55%±8.80%和CD4+/CD8+的比值1.66±0.51,差异有统计学意义(P<0.05);免疫失败组CD8+百分比29.61%±7.08%高于免疫成功组CD8+百分比24.62%±7.23%,差异有统计学意义(P<0.05)。5.婴幼儿外周血细胞因子检测结果:免疫失败组外周血血清IL-12、IFN-γ和IL-23的含量分别为31.38±5.44(pg/ml)、30.35±0.64(pg/ml)和30.45±7.38(pg/ml);免疫成功组外周血血清IL-12、IFN-γ和IL-23的含量则分别为40.30±6.48(pg/ml)、32.68±2.08(pg/ml)和35.54±7.90(pg/ml)。免疫失败组中的IL-23、IL-12和IFN-γ含量均低于免疫成功组的含量,差异有统计学意义(P<0.05)。6. DC亚群、T亚群和细胞因子相关性分析结果:DC1(MDC)亚群百分比与IL-12表达、DC2(MDC)亚群百分比与IFN-γ表达含量均呈正相关。将IL-12和IFN-γ表达含量进行相关性比较,两者亦呈正相关。DC亚群与T亚群进行相关性比较,DC亚群与CD4+亚群呈正相关,与CD8+无相关关系。结论1.乙肝病毒携带孕妇在孕7、8、9月注射HBIG 200 IU/次,注射3次,能有效阻断宫内感染;剖宫产和自然分娩对HBV宫内感染无影响,但剖宫产联合孕晚期注射HBIG阻断效果更好,且两因素有正交互作用;孕妇HBeAg阳性与孕晚期不注射HBIG者宫内感染率高,两因素有正交互作用。2.宫内感染新生儿免疫应答率低于正常新生儿和非宫内感染新生儿,宫内感染与免疫无应答有关(OR=2.315,P<0.05),这可能是导致免疫失败原因之一。3.免疫失败组存在着DC亚群百分比和绝对数的降低,树突状细胞抗原提呈功能下降,诱导特异性免疫反应能力低下,导致了免疫失败。4.免疫失败组T淋巴细胞亚群百分比、CD4+/CD8+比值降低,可能存在着T淋巴细胞亚群失衡,细胞免疫功能紊乱,这可能与免疫失败有关。5.免疫失败组血清IL-23、IL-12、IFN-γ表达均降低,细胞因子含量降低使得细胞免疫和体液免疫均下降,造成联合免疫失败。