【摘 要】
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乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,在分子水平上具有高度的异质性,不同的分子分型的预后与治疗方法也不同。HER2+是恶性程度高的重要标志,也是预后和治疗的重要标准。拉帕替尼是酪氨酸激酶抑制剂,可以通过阻断HER1（表皮生长因子受体）和HER2酪氨酸激酶的活化来抑制下游信号通路的激活,从而抑制人乳腺癌细胞的增殖,促进凋亡,但其对不同来源人乳腺癌细胞的作用有差异。研究显示,木犀草素具有抗乳腺癌的作用,其
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乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,在分子水平上具有高度的异质性,不同的分子分型的预后与治疗方法也不同。HER2+是恶性程度高的重要标志,也是预后和治疗的重要标准。拉帕替尼是酪氨酸激酶抑制剂,可以通过阻断HER1（表皮生长因子受体）和HER2酪氨酸激酶的活化来抑制下游信号通路的激活,从而抑制人乳腺癌细胞的增殖,促进凋亡,但其对不同来源人乳腺癌细胞的作用有差异。研究显示,木犀草素具有抗乳腺癌的作用,其联合用药的作用也比较明显。基于文献报道和预实验结果,我们设想拉帕替尼联合木犀草素用药,增强拉帕替尼对乳腺癌的抑制作用,通过细胞实验,从信号通路的角度阐述分子机理,用动物实验验证联合用药对单独用药的优势。为HER2+人乳腺癌提供一种新的用药策略。第一部分实验中,分别用拉帕替尼和木犀草素处理不同来源HER2+人乳腺癌细胞SKBR-3（人乳腺癌细胞）、BT-474（人乳腺导管癌细胞）和ZR-75-1（人乳腺癌细胞）。结果发现,拉帕替尼对三种HER2+人乳腺癌细胞的增殖都有抑制作用,但差异较大。木犀草素对这三种细胞也具有抑制作用且差异较小。我们随后用拉帕替尼和木犀草素联合用药处理,结果发现联合用药可以增强拉帕替尼对不同来源HER2+人乳腺癌细胞的抑制作用。第二部分实验中,WB（蛋白免疫印迹法）、qPCR（实时定量PCR）和IHC（免疫组织化学）结果发现FOXO3a和Keap1在乳腺癌组织中都是低表达,Nrf2和NQO1在乳腺癌组织中都是高表达,随后我们在细胞水平上通过抑制Nrf2、过表达Keap1和FOXO3a等方法验证了 FOXO3a/Keap1/Nrf2/NQO1信号通路中的调节关系,并用挽救实验证明联合用药是通过影响这个通路实现对HER2+人乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭的抑制作用和凋亡的促进作用。第三部分实验中,采用两株人乳腺癌细胞对裸鼠进行皮下成瘤,并用拉帕替尼和木犀草素联合用药处理裸鼠,分别检测裸鼠体重、瘤体大小、成瘤后瘤体组织中FOXO3a/Keap1/Nrf2/NQO1信号通路中各个蛋白表达情况。结果发现,联合用药组肿瘤的体积均显著小于单独用药组,肿瘤生长速度显著慢于单独用药组,并且联合用药组的皮下肿瘤的体积和肿瘤生长速度均显著小于单独用药组。拉帕替尼和木犀草素联合用药组中的FOXO3a、Keap1蛋白表达量相对于单独用药有明显增多,Nrf2和NQO1蛋白表达量均有明显减少。这些数据都显示拉帕替尼联合木犀草素对HER2+人乳腺癌抑制作用显著增强,其可能机制是通过影响人乳腺组织中FOXO3a/Keap1/Nrf2/NQO1信号通路中蛋白的表达来实现的。
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