羊栖菜多酚的分离纯化与功能活性研究

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我国拥有极为丰富的褐藻资源,褐藻多酚作为一种海洋植物多酚近年来受到广泛关注。本论文以大型褐藻羊栖菜为原料,建立羊栖菜多酚的溶剂提取、大孔树脂柱层析纯化工艺,采用制备型高效液相色谱对多酚主要组分进行分离,通过HPLC-MS对其结构进行初步分析,并对羊栖菜多酚的体外清除自由基活性、对H2O2诱导的肝细胞氧化损伤保护作用和小鼠体内抗氧化活性进行研究。在考察各单因素对多酚浸出效果的影响的基础上,采用响应面法优化得到羊栖菜多酚浸提条件为:提取温度40℃、乙醇浓度25%、提取时间3 h、液料比30:1(V/W),建立羊栖菜浸提数学模型,在此条件下实测羊栖菜多酚浸出量为8.84 mg/g,与模型浸出量理论值8.97 mg/g无显著差异,说明该优化模型具有可行性。柱层析纯化工艺研究表明,大孔树脂D-101对羊栖菜多酚具有较好的吸附、解吸性能,柱层析纯化条件为上样浓度2.4 mg/mL、上样速率1 BV/h、50%乙醇溶液为洗脱剂、洗脱速率为3 BV/h。经D-101树脂纯化的羊栖菜多酚,利用半制备型高效液相分离,可得三个主要组分,通过质谱分析推测三个组分的分子式分别为C10H3O15、C6H4O2、C8H3O8。羊栖菜多酚体有较强的体外清除自由基活性,清除DPPH、羟自由基IC50值分别为4.57mg/L、13.63 mg/L,总抗氧化能力为69.56 U/mg。肝细胞离体培养实验结果表明,羊栖菜多酚可显著提高H2O2氧化损伤时肝细胞内SOD(p<0.05)、CAT(p<0.01)、GSH-PX(p<0.01)活性,降低细胞中LDH释放量,减少过氧化脂质产物丙二醛(MDA)含量,对H2O2诱导的肝细胞氧化损伤表现出明显的保护作用。羊栖菜多酚能显著降低小鼠体内丙二醛(MDA)含量(p<0.01),显著降低血清中MDA含量(p<0.01);低、中、高剂量组的羊栖菜多酚都可极显著提高血清中GSH-PX活性(p<0.01),高剂量组可显著提高肝脏中GSH-PX活性(p<0.01);羊栖菜多酚中、高剂量组可显著提高小鼠血清和肝脏中SOD活性(p<0.01);羊栖菜多酚降低蛋白质羰基的作用明显,中、高剂量组有极显著效果(p<0.01)。动物实验结果表明,羊栖菜多酚可显著提高小鼠抗氧化能力。
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